【摘 要】
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目的:本研究拟采用高糖（HG）刺激人肾小管上皮细胞（HK-2）建立体外高糖模型,并通过沉默和过表达HK-2细胞中的肝再生增强因子（Augmenter of liver regeneration,ALR）水平以进一步了解ALR对人肾小管上皮细胞脂质表达的影响。方法:将HK-2细胞分为:低糖组（LG组,5.5m M）、糖浓度为14m M组（NG组）、高糖组（HG组,30m M）、糖浓度为45m M组（
【基金项目】
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国家自然科学基金（81860139）；
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目的:本研究拟采用高糖（HG）刺激人肾小管上皮细胞（HK-2）建立体外高糖模型,并通过沉默和过表达HK-2细胞中的肝再生增强因子（Augmenter of liver regeneration,ALR）水平以进一步了解ALR对人肾小管上皮细胞脂质表达的影响。方法:将HK-2细胞分为:低糖组（LG组,5.5m M）、糖浓度为14m M组（NG组）、高糖组（HG组,30m M）、糖浓度为45m M组（45m M）、糖浓度为60m M组（60m M）、高渗透压组（HO组,葡萄糖5.5m M+甘露醇24.5m M）、高糖+ALR低表达组、高糖+ALR过表达组、高糖+空白病毒对照组。CCK-8检测不同糖浓度组、高渗透压组及转染后的HK-2细胞在0h、24h、48h、72h的细胞活性;油红O染色不同糖浓度组、高渗透压组及高糖刺激转染后HK-2细胞内脂滴的变化;应用慢病毒转染技术在HK-2细胞下调和过表达ALR,嘌呤霉素筛选稳定转染的细胞株;RT-PCR检测ALR m RNA表达水平;Western Bolt检测ALR蛋白表达水平。结果:（1）CCK-8结果显示:各组细胞的（LG组、NG组、HG组、HO组）细胞活性随时间的延长,细胞活性增加,且在48h、72h测得HG组细胞活性较LG组、NG组、HO组减低,且差别有意义（P<0.05）。（2）HK-2细胞油红O染色:在不同高糖浓度（30m M、45m M、60m M）刺激下,HK-2细胞中均有脂滴产生,随着时间的延长脂滴逐渐增多,且随着高糖浓度的升高脂滴逐渐增多;在LG组、HG组、HO组细胞中,HG组HK-2细胞中脂滴最多,HO组次之,LG组最少,并随着时间的增加,脂滴的量逐渐增多。（3）RT-PCR检测在LG组、NG组、HG组、HO组细胞中均有ALR m RNA的表达,且不同组中ALR m RNA的表达水平差别无统计学意义（P>0.05）,但其结果趋势与Western Bolt结果相似。（4）Western Bolt结果显示,在LG组、NG组、HG组、HO组细胞中均表达ALR蛋白,且与LG组相比NG组、HG组、HO组细胞中ALR蛋白表达减低,差异有统计学意义（P<0.05）,ALR蛋白表达水平有随着糖浓度升高而降低的趋势。（5）HK-2细胞最适嘌呤霉素筛选浓度:3μg/ml。（6）构建稳定下调及过表达ALR的HK-2细胞株:RT-PCR检测结果显示,与NG组、ALR过表达组及空白病毒对照组比较,ALR低表达组细胞ALR m RNA表达程度显著减少（P<0.05）;与NG组、ALR低表达组及空白病毒对照组比较,ALR过表达组细胞ALR m RNA表达程度显著增加（P<0.05）。CCK-8结果显示,下调及过表达ALR对HK-2细胞的细胞活性差别无统计学差异（P>0.05）,但下调ALR后细胞活性有所下降。（7）油红O染色结果显示:在高糖（30m M）浓度刺激下,ALR低表达组、ALR过表达组及空白病毒对照组细胞中均有脂滴产生,并随时间的延长脂滴逐渐增加。其中ALR低表达组内脂滴最多,空白病毒对照组次之,ALR过表达组最少。结论:调节ALR水平对HG培养下肾小管上皮细胞脂质代谢有影响。下调ALR在HK-2细胞中的表达水平,增加了高糖刺激下HK-2细胞脂滴表达;增加ALR在HK-2细胞中的表达水平,降低了高糖刺激下HK-2细胞脂滴表达。
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