葛明胶囊抗高脂血症性脂肪肝作用及活性成分含量测定研究

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目的:通过研究葛明胶囊对高脂血症性脂肪肝大鼠血脂、肝功能及SOD水平的影响,探讨葛明胶囊抗实验性高脂血症脂肪肝的药效作用;同时通过建立葛明胶囊多种活性成分的含量测定方法和测定黄酮类成分的含量,为进一步阐明葛明胶囊抗高脂血症性脂肪肝的作用机制及质量标准研究提供实验数据。方法:1、60只雄性SD大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、葛明胶囊低、中、高剂量组及阳性药物组,每组10只。正常组普通饲料喂养,其余5组高脂饲料连续喂养6w,造模同时给药葛明胶囊低、中、高剂量组大鼠分别灌服3.89、7.78、15.56 g/kg的葛明胶囊浸膏溶液,阳性药物组灌服33.33 mg/kg的辛伐他汀溶液,连续给药6 w,正常组和模型组则灌服等量蒸馏水。于第6 w末取血及肝组织,测定血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C、ALT、AST、SOD等指标水平,并行病理组织学检查。2、通过HPLC法测定葛明胶囊多种成分含量。Agilent Zorbox Eclipse XDB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μg),流动相甲醇(A)-0.15%甲酸水溶液(B),梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,DAD检测器,进样量5μL,检测波长254 nm。3、通过紫外分光光度法测定葛明胶囊的总黄酮含量。以总黄酮含量为考察指标,采用单因素实验方法优选葛明胶囊提取条件,以空白管作对照,用酶标仪在250 nm处测定其吸光度,由标准曲线回归方程算出含量。结果:1、与正常对照组对比,模型组大鼠的体重、肝重、肝指数及血清中TC、TG、LDL-C、ALT、AST等指标均明显升高,而HDL-C、SOD明显降低,肝组织中脂肪变性明显加重。与模型组对比,葛明胶囊给药后,大鼠的体重、肝重、肝指数及血清TC、TG、LDL-C等明显降低,而HDL-C有升高趋势,SOD活力明显升高,肝组织脂肪变性明显减轻;并呈现一定剂量依赖性。2、建立的HPLC法可同时测定葛明胶囊多种成分的含量,经方法学考察,分离度、线性关系、精密度、稳定性、重复性、加样回收率均良好。3、最佳提取条件:70%乙醇为提取溶剂,以1:30为料液比,40 min超声时间,45KHz超声频率。采用紫外分光光度法测定总黄酮含量,线性关系、精密度、稳定性、重复性、加样回收率均良好。葛明胶囊及其组方中药、浸膏中总黄酮平均含量分别为61.01、18.11、27.42 mg/g,RSD分别为2.05%、1.00%、0.88%(n=3)。结论:葛明胶囊对高脂饲料喂养诱导的高脂血症性脂肪肝模型大鼠具有良好的防治作用。其能调节血脂异常,提高机体抗氧化能力,降低氧化应激水平,并能在一定程度上修复肝脏功能,改善肝组织的脂肪变性程度。本研究建立的葛明胶囊中多种活性成分含量同时测定及总黄酮含量测定方法简便科学,进一步提高了该复方中药制剂的质量标准,为该产品的新药研究提供了科学依据。
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