癌症是威胁人类生存与健康的巨大杀手,相比其他病症,其治愈率非常低、是导致患者死亡主要原因之一。目前临床治疗癌症的主要手段有手术切除治疗、放射性治疗和化学治疗等。但手术治疗和放射性治疗对晚期患者疗效不佳且给患者带来较大的痛苦,故在癌症治疗的发展中,化疗药无疑是治疗癌症的最佳选择。作为临床治疗癌症的一线化疗药物紫杉醇(Paclitaxel,PTX)却存在三方面的不足:(1)容易发生耐药现象;(2)紫杉醇具有高度的亲脂性,水溶性较差;(3)紫杉醇具有诸多的不良反应,如骨髓抑制、器官毒性以及脱发等。2-甲氧基雌二醇(2-ME)是雌二醇的天然代谢产物,它可以降低肿瘤细胞的耐药性。基于上述研究现状,本课题联合紫杉醇/2-甲氧基雌二醇构建叶酸白蛋白纳米递药系统,即为PTX/2-ME@FA-HSANPs,以叶酸为靶头、人白蛋白为载体,共载紫杉醇/2-甲氧基雌二醇,将其制备为粒径为100-200 nm左右的纳米粒。利用其主动和被动靶向肿瘤组织的作用介导药物分布,联合化学治疗和增敏的效应,降低抗肿瘤药物耐药的恶化现象,增加药物在肿瘤部位的蓄积与摄取,降低毒副作用,增强化疗药物的治疗效果。该研究的主要内容分为三部分:第一部分PTX/2-ME@FA-HSANPs的制备与表征采用化学交联法-溶剂挥发法制备共同包载两种药物PTX和2-ME的叶酸偶联白蛋白纳米粒PTX/2-ME@FA-HSANPs。经粒径分析仪和透射电镜检测其粒径、电位和外貌特征,其结果为:制剂PTX/2-ME@FA-HSANPs平均粒径为180±12.31 nm、电位为-20 mV,粒径大小和电位均一稳定,透射电镜(TEM)表明纳米粒形状为圆形。采用HPLC法测定PTX/2-ME@FA-HSANPs的包封率、载药量和药物释放特征,其结果为:包封率为(PTX:92.3±0.57%、2-ME:88.3±0.31%);载药量为(PTX:8.3±0.15%、2-ME:7.9±0.41%)。体外药物释放结果显示PTX/2-ME@FA-HSANPs能释放较高的药量,达到治疗所需血药浓度。第二部分PTX/2-ME@FA-HSANPs的体外抗肿瘤活性研究以食管癌亲本细胞株EC109和其耐药(紫杉醇)细胞株EC109/Taxol为模型细胞,考察PTX/2-ME@FA-HSANPs体外抗肿瘤活性。采用四唑盐比色法(MTT比色法)考察各实验组对EC109和EC109/Taxol细胞的抑制增殖作用,经数据分析其IC50值与耐药指数;采用荧光显微镜和流式细胞仪检测EC109和EC109/Taxol细胞对PTX/2-ME@FA-HSANPs的摄取能力;最后使用流式细胞仪技术分析各个对照组对细胞的凋亡和周期的影响,初步考察其抗肿瘤的机理。MTT实验结果显示:两药联用可以降低肿瘤耐药细胞的耐药指数,增加对肿瘤细胞的杀伤作用,再对比其他的对照组,靶向制剂组PTX/2-ME@FA-HSANPs对肿瘤细胞的抑制作用最强;细胞摄取实验的结果显示,相比于无叶酸靶头的的白蛋白纳米粒,肿瘤细胞能摄取更多带有叶酸靶头的白蛋白纳米粒,说明该纳米粒可促进抗肿瘤药物更多的进入肿瘤细胞内发挥药效;当PTX联用2-ME后,细胞凋亡数量增加,尤其是将两药共包封于靶向纳米粒中时,诱导细胞凋亡的数量显著增加,对细胞的增殖具有明显的抑制作用;PTX和2-ME两种药物以及其靶向纳米制剂PTX/2-ME@FA-HSANPs主要是通过影响生长周期G2/M期来阻滞肿瘤细胞生长。第三部分PTX/2-ME@FA-HSANPs的药代动力学与体内抗肿瘤活性研究以SD大鼠为模型动物,研究制剂组PTX/2-ME@FA-HSANPs的体内药代动力学特征。用S180荷瘤小鼠为模型动物,采用尾静脉注射给药方式,研究PTX/2-ME@FA-HSANPs的体内抗肿瘤活性。通过肿瘤体积大小比较和HE组织染色判断肿瘤治疗效果;通过对小鼠外貌、HE组织染色切片、骨髓抑制和肝脏毒性的血常规检查来评定制剂的在体内的安全性。相比于紫杉醇和2-甲氧基雌二醇两药的原料组,制剂组PTX/2-ME@FA-HSANPs在体内的药物血浆清除速率减慢,半衰期与平均滞留时间明显延长,生物利用度显著增加;两药联用后可以达到协同作用,抑瘤作用明显,从相对瘤体积,瘤重等指标看来,靶向制剂组PTX/2-ME@FA-HSANPs抑瘤效果进一步增强。病理学结果表明在增强抑瘤作用的同时并没有对其脏器产生明显毒副作用。综上所述,该递药体系共包封化疗药(紫杉醇)和增敏剂(2-甲氧基雌二醇)的叶酸偶联白蛋白纳米递药体系PTX/2-ME@FA-HSANPs,不仅可降低抗肿瘤药物的耐药性,而且具有靶向肿瘤的治疗作用,减轻患者的疾苦。该递药体系PTX/2-ME@FA-HSANPs是一个较好的肿瘤治疗方案。