各类农药的大量广泛使用,使得各类蔬菜、水果、茶叶及农作物的产量大幅提升。但是人类食用这些含有农药的食品后会引发健康问题,每年都有因食用农残超标食品导致食物中毒的事件的报道。现在各个国家都对农产品的农药残留限量做出了法律规定。为了人类的安全健康及我国食品的顺利出口,建立快速简便的方法检测农药残留非常必要。本实验利用噬菌体展示技术构建了针对氰戊菊酯的基因工程抗体库,并对抗体库进行了筛选,获得了氰戊菊酯基因工程抗体。从经过氰戊菊酯免疫的Balb/c小鼠脾脏组织提取总RNA,纯化分离mRNA,反转录得到cDNA,以cDNA为模板利用兼并引物扩增重链和轻链可变区基因,重链可变区大小350bp,轻链可变区大小325bp,轻链可变区基因与重链可变区基因、柔性连接肽通过重叠延伸拼接成单链抗体基因片段(scFv), scFv大小约750bp。scFv和噬菌粒载体pCANTAB5E经Sfi I和Not Ⅰ双酶切处理,连接转化TG1感受态细胞,构建初级抗体库,抗体库库容5.16×106。将辅助噬菌体活化,扩大培养,测定滴度1.3×1013cfu/mL。利用辅助噬菌体侵染含有重组噬菌粒载体的TG1细胞,使scFv展示在噬菌体表面。利用展示在噬菌体表面的特异性scFv与包被原具有亲和作用的原理对初级抗体库进行淘选,经过五轮淘选富集特异性噬菌体克隆。对富集的特异性克隆用菌落PCR检测,从第二轮起重组阳性率为100%。挑取阳性克隆进行噬菌体ELISA检测,结果筛选到21,22,23,24,25,26,27,28,41,42,43,51,52,54,58,共15个阳性克隆。挑选显色结果较好的5个克隆22,26,27,51,52测序,获得氰戊菊酯scFv序列,分析结果重链可变区基因属于IGHV1家族,编码119个氨基酸,轻链可变区基因属于IGKV4家族,编码108个氨基酸。本实验的开展为大量制备氰戊菊酯基因工程抗体、建立氰戊菊酯的ELISA检测方法奠定了基础。