论文部分内容阅读
目的:妊娠期高血压疾病是妊娠期特有的一类常见且严重的疾病,以重度子痫前期最多见,常合并胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR),导致孕产妇与围产儿的不良结局。为探索孕妇脐动脉血管平滑肌细胞(human umbilical arterial smooth muscle cells,HUASMCs)中经典瞬时受体电位通道6(Transient Receptor Potential Canonical 6,TRPC6)与重度子痫前期患者的关系,为发现妊娠期高血压疾病的新型治疗方法提供基础理论和依据。方法:(1)按照标准选取我院产科住院病人经阴道分娩或剖宫产分娩的10例正常组(Normal Patients,NP)与同期的10例患有重度子痫前期(Severe Preeclampsia,SPE)的孕妇相对照;15例早发型重度子痫前期(early-onset severe preeclampsia,ESPE)与同期的15例晚发型重度子痫前期(late-onset severe preeclampsia,LSPE)的孕妇相对照;10例重度子痫前期合并胎儿生长受限(severe preeclampsia with fetal growth restriction,SPEFGR)与同期的10例重度子痫前期未合并胎儿生长受限(severe preeclampsia no fetal growth restriction,SPENFGR组)的孕妇相对照。(2)采用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR experiment,QPCR)与蛋白免疫印迹技术(Westernblotting)来进行检测。(3)QPCR:将所有样品提取的RNA逆转录为c DNA(complementary DNA,cDNA),将甘油醛磷酸脱氢酶(glyceraldehyde phosphate dehydrogenase,GAPDH)设为内参基因,进行QPCR,TRPC6与GAPDH的Ct值之差为ΔCt值,实验组与对照组的ΔCt之差为ΔΔCt,使用2-ΔΔCt值(即相对定量法来表示实验组与对照组的比值数)来表示实验组与对照组的TRPC6的mRNA的表达有无差异。(4)采用Western blotting技术成像对所得到的条带测定灰度值,TRPC6与GAPDH表达的蛋白的灰度值比值即为TRPC6蛋白的相对表达量。(5)结果采用均数±标准差(xˉ±s)来表示,运用SPSS 17.0对结果进行检验,若符合正态分布则进行t检验,P<0.05时差异有统计学意义。结果:(1)对比分析NP组与SPE组,QPCR结果:10例NP组HUASMCs的TRPC6的ΔCt为9.5833±0.9132,10例SPE组HUASMCs的TRPC6的ΔCt为8.4467±0.9817,差异有统计学意义(P=0.003<0.05),通过计算2-ΔΔCt值为2.2955±0.6830。Western blotting结果:10例NP组的HUASMCs的TRPC6/GAPDH内参的灰度值比值为0.4823±0.0805,10例SPE组的HUASMCs的TRPC6/GAPDH内参的灰度值比值为0.8722±0.0789,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)对比分析ESPE组与LSPE组,QPCR结果:15例ESPE组HUASMCs的TRPC6的ΔCt值为5.9180±0.3024,15例LSPE组HUASMCs的TRPC6的ΔCt值为7.2830±0.2733,差异具有统计学意义(P<0.05),再通过计算得到2-ΔΔCt值为2.2964±1.1793;Western blotting结果:15例ESPE组HUASMCs的TRPC6与GAPDH的灰度值比值为0.9189±0.0495,15例LSPE组HUASMCs的TRPC6与GAPDH的灰度值比值为0.6956±0.0365,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)对比SPEFGR组与SPENFGR组,QPCR结果:10例SPEFGR组HUASMCs的TRPC6的ΔCt为4.7702±0.5699,10例SPENFGR组HUASMCs的TRPC6的ΔCt为6.1758±0.5268,差异具有统计学意义(P<0.05),通过计算2-ΔΔCt值为2.6991±0.7541;Western blotting结果:10例SPEFGR组的TRPC6/GAPDH的灰度值比值为0.9355±0.0612,10例SPENFGR组HUASMCs的TRPC6/GAPDH的灰度值比值为0.8110±0.0418,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)重度子痫前期孕妇脐动脉血管平滑肌中TRPC6通道mRNA及蛋白的表达水平均高于正常孕妇,提示了TRPC6的表达水平改变可能与重度子痫前期的发生发展有关;(2)早发型重度子痫前期孕妇脐动脉血管平滑肌中TRPC6通道mRNA及蛋白的表达水平均高于晚发型重度子痫前期孕妇,提示重度子痫前期发病时间的早晚可能与TRPC6表达的水平差异有关;(3)重度子痫前期合并胎儿生长受限孕妇脐动脉血管平滑肌中TRPC6通道mRNA及蛋白的表达水平均高于重度子痫前期未合并胎儿生长受限孕妇,提示胎儿生长受限的发生可能与TRPC6的表达上调有关。