乳腺癌相关成纤维细胞对乳腺癌细胞的作用及转基因溶瘤性单纯疱疹病毒对人鼻咽癌、肝癌、甲状腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤的治疗作用

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目的研究乳腺癌相关成纤维细胞(CAFs)对乳腺癌细胞株增殖和乳腺癌干细胞比例的影响。材料与方法分离和鉴定人乳腺癌相关成纤维细胞和非肿瘤成纤维细胞(NAFs),用无血清培养基培养CAFs和NAFs,收集上清液,分别与乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-468共培养48h,通过细胞计数以及流式细胞术,检测其对乳腺癌细胞增殖和细胞周期的影响;并利用流式细胞术,检测乳腺癌干细胞(CD44+CD24﹣)的细胞比例。结果NAFs和CAFs中表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的细胞比例分别为6.00%±0.57%、53.33%±2.33%(P<0.001);NAFs和CAFs的上清液对乳腺癌细胞株的增殖和细胞周期没有明显的影响,培养CAFs或NAFs的上清液处理48h后,MCF-7细胞对照组、NAFs组和CAFs组的G2/M期细胞比例分别为5.32%±0.02%、5.63%±0.03%、6.03±0.03%(P>0.05);CAFs和NAFs均能诱导乳腺癌干细胞的产生,CAFs组和NAFs组的MCF-7干细胞比例分别为对照组的3.51和1.41倍(P<0.05);MDA-MB-468干细胞比例分别为对照组的4.76和1.35倍(P<0.05)。结论乳腺CAFs高表达α-SMA,培养CAFs的上清液在体外对乳腺癌细胞的增殖没有明显影响,但能诱导乳腺癌干细胞的产生,提示其可能在肿瘤复发和转移中起重要的作用。目的观察溶瘤性单纯疱疹病毒(HSV)载体G47Δ对鼻咽癌、肝癌、甲状腺癌裸鼠皮下模型的治疗效果,探讨其对人鼻咽癌、肝癌、甲状腺癌的治疗作用。材料与方法体外培养人鼻咽癌(SUNE1、CNE2)、肝癌(SMMC-7721、BEL7404)、甲状腺癌细胞(ARO, FRO),通过Balb-c裸鼠左侧皮下注射人鼻咽癌、肝癌、甲状腺癌细胞构建皮下肿瘤模型,在肿瘤直径约5mm时,病毒治疗组每周两次皮下瘤内注射2×107/50ul G47Δ,共四次,对照组只注射用于重悬病毒的缓冲液。游标卡尺测量肿瘤直径并计算肿瘤体积(V=a×b2/2)。肿瘤最大直径达18mm或者裸鼠表现出衰老的特征如:毛发凌乱、昏睡、蜷缩、对刺激无明显反应时处死裸鼠,比较两组裸鼠肿瘤大小及生存时间。结果在鼻咽癌、甲状腺癌裸鼠皮下模型中,与对照组相比,病毒治疗组肿瘤完全消退。肝癌SMMC-7721和BEL-7404皮下种植瘤裸鼠病毒治疗组分别有5只和4只裸鼠的皮下种植瘤完全消退。在鼻咽癌、肝癌、甲状腺癌裸鼠皮下模型中,病毒治疗组生存时间明显长于对照组。结论研究结果提示瘤内注射近期构建的溶瘤性单纯疱疹病毒载体G47Δ可有效治疗鼻咽癌、肝癌、甲状腺癌皮下肿瘤模型。本实验为G47Δ用于鼻咽癌、肝癌、甲状腺癌临床治疗提供了线索,值得进一步进行临床试验。
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