论文部分内容阅读
目的:食管癌(EC)在2018年全球癌症发病率排名第七,死亡率排名第六。尽管诊断方法和多学科治疗有所进步,食管鳞状细胞癌患者的预后仍然很差。因此,研究食管癌发生、发展相关的分子机制,有助于发现可能的早期诊断和预后生物标记物。MicroRNAs(miRNAs)是一类小的非编码RNA,它们参与转录后基因表达调节。大量研究表明,mi RNAs在癌细胞的分化、增殖、代谢和凋亡中起着关键的调节作用。本研究旨在鉴别食管鳞癌患者血浆来源外泌体中的miRNAs不同含量水平。目前miR-103a-2-5p在食管癌患者外泌体中的含量水平与作用机制尚未见报道。方法:1.对食管癌及对照组患者外周血浆外泌体miRNA进行测序。分析并分别于Het-1A细胞、TE-1细胞及KYSE-150细胞中验证其含量情况。2.分别过表达TE-1细胞miR-103a-2-5p,干扰KYSE-150细胞miR-103a-2-5p,通过CCK-8,划痕实验,Transwell实验观察miR-103a-2-5p变化对两种食管癌细胞增殖迁移能力的影响。3.收集过表达miR-103a-2-5p及对照的TE-1细胞上清外泌体,加入KYSE-150及TE-1细胞培养基中孵育24小时后,通过CCK-8,划痕,Transwell实验观察过表达miR-103a-2-5p后,TE-1外泌体能否进一步促进食管癌细胞的增殖及迁移。4.分析miR-103a-2-5p作用的潜在靶mRNA,荧光实时定量PCR检测靶基因的表达水平。结果:1.我们使用miRNA测序的方法检测了9例食管鳞状细胞癌及9例非肿瘤患者外周血外泌体。61条miRNA在食管鳞癌患者血浆来源的外泌体中的含量水平与对照组存在显著性差异。分析并筛选到含量差异4倍及以上的mi RNA共10条。分别于Het-1A、TE-1及KYSE-150细胞株中验证上述10条mi RNA表达情况。其中miR-103a-2-5p在细胞株中含量趋势与mi RNA测序趋势及数据库的临床数据相符,故选择mi R-103a-2-5p进行下一步实验。2.与对照组相比,在TE-1中上调miR-103a-2-5p能显著促进食管癌细胞增殖和迁移,在KYSE-150中下调miR-103a-2-5p能显著抑制食管癌细胞增殖和迁移。3.与对照组相比,与高水平miR-103a-2-5p的外泌体共培养也可促进食管癌细胞增殖和迁移。4.利用TargetScan等生物信息学工具和q-PCR预测CDH11和NR3C1是miR-103a-2-5p的潜在靶点。荧光实时定量PCR结果表明,与对照组相比,与高水平miR-103a-2-5p的外泌体共培养后的TE-1和KYSE-150细胞株中的CDH11、NR3C1的m RNA水平均明显降低。结论:本研究首次通过miRNA测序的方法发现,在食管鳞状细胞癌的外周血外泌体中miR-103a-2-5p的含量增高,我们证实了外泌体来源的mi R-103a-2-5p能促进食管鳞癌细胞增殖和迁移,其或可成为食管鳞癌新的早期诊断或预后生物标记物。