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ATP5J,又称偶联因子6(coupling factor6, CF6),是F1F0-ATP合酶(F1Fo-ATPase)的组成亚单位之一。F1Fo-ATP合酶,属F型ATP酶,在细胞内催化能源物质ATP的合成,主要由两部分组成：水溶性的F1复合体和脂溶性的跨膜部分F0。ATP5J是F0的成分之一,起着连接F1和F0的作用。最近我们在筛查结直肠癌相关基因时发现结直肠癌临床标本中ATP5J的mRNA表达水平明显增高。尽管目前已发现肿瘤细胞中存在ATP合酶某些亚单位的表达异常,但是关于ATP5J基因在结直肠癌中的表达情况及其功能和意义还没有可检索的报道。目的：验证ATP5J基因在结直肠癌组织中差异表达的情况,并分析其临床意义；研究ATP5J表达高低对结肠癌细胞的生物学行为和抗肿瘤治疗敏感性的影响,从而分析其功能。方法：运用RT-PCR、免疫印迹及免疫组化法检测结直肠癌细胞系、结直肠癌临床标本肿瘤组织及正常组织中ATP5J基因在mRNA水平和蛋白质水平的表达情况,分析其中的差异；收集相应结直肠癌病人的临床病理资料,并进行随访,分析ATP5J表达高低和肿瘤临床病理特征及患者预后之间的关系,评价ATP5J在结直肠癌中差异表达的临床意义。设计针对ATP5J mRNA的小分子RNA,构建ATP5J表达质粒pcDNA3.1(+)/ATP5J,通过小RNA干扰来下调或质粒转染来上调结肠癌细胞DLDl中ATP5J的表达水平,进而运用MTT、细胞克隆形成实验、划痕实验、细胞迁移试验以及细胞周期分析等方法来评估ATP5J基因表达的改变对肿瘤细胞形态、生长、存活、迁移以及药敏等方面的影响,评价ATP5J基因在结肠癌细胞中的功能。结果：结直肠癌临床标本肿瘤组织中ATP5J的表达在mRNA水平和蛋白质水平均明显高于正常组织,而且在对应的转移淋巴结中它的表达水平也明显高于原发灶中的水平(P<0.05)。临床病理资料和随访结果分析显示,ATP5J的表达水平仅仅和肿瘤的分化程度相关(P=0.045),和患者的性别、年龄、肿瘤T分期、淋巴结转移情况,甚至生存率均无关(P>0.05)。在结直肠癌细胞系(DLD1, RKO, SW620,SW480和Colo320)中,ATP5J的表达明显高于正常人成纤维细胞(NHFB)(P<0.05).通过小RNA干扰来下调结肠癌细胞DLD1中ATP5J的表达,会影响该肿瘤细胞的迁移能力,并使得肿瘤细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)的处理更加敏感；而通过稳定转染ATP5J表达质粒来上调该基因的表达则会得到相反的结果,即高表达ATP5J促进肿瘤细胞迁移,并抵抗5-Fu的治疗(P<0.05)；但其表达水平的改变对肿瘤细胞的形态、生长以及细胞周期等无明显影响(P>0.05)。结论：ATP5J基因在结直肠癌中存在高表达,这种高表达和临床肿瘤分化程度存在相关性,但与患者预后无关。细胞实验提示ATP5J高表达和结肠癌细胞的迁移能力及5-Fu治疗耐药有关。