【摘 要】
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目的:1.探讨静压力对聚乳酸-乙醇酸聚合物（PLGA）支架上人牙龈成纤维细胞（HGFs）中TGF-β1、Smad3、p-Smad3、Smad7及Smurf1表达的影响。2.探讨过表达Smurf1对静压力作用下HGFs-PLGA中TGF-β1、Smad3、p-Smad3、及Smad7表达的影响。方法:1.采用经典的组织块培养法对离体牙龈组织进行原代培养,经传代后取第4-6代HGFs建立PLGA支架三
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目的:1.探讨静压力对聚乳酸-乙醇酸聚合物（PLGA）支架上人牙龈成纤维细胞（HGFs）中TGF-β1、Smad3、p-Smad3、Smad7及Smurf1表达的影响。2.探讨过表达Smurf1对静压力作用下HGFs-PLGA中TGF-β1、Smad3、p-Smad3、及Smad7表达的影响。方法:1.采用经典的组织块培养法对离体牙龈组织进行原代培养,经传代后取第4-6代HGFs建立PLGA支架三维培养模型。2.对HGFs-PLGA施加25g/cm~2顶-底单向的静压力构建重物加载模型,实验组根据加力时间的不同分为12h、24h、48h组,对照组为0h组（即未加力组）。采用RT-q PCR和Western Blot技术检测HGFs-PLGA中TGF-β1、Smad3、p-Smad3、Smad7及Smurf1的表达情况。3.构建过表达Smurf1的慢病毒载体,转染第4-6代HGFs,经嘌呤霉素筛选后,采用RT-q PCR和Western Blot技术检测过表达情况。CCK-8法检测空白对照组（未作任何处理对正常培养细胞,即Control组）、空载体组（阴性对照慢病毒转染细胞,即NC组）及过表达组（过表达Smurf1的慢病毒转染细胞,即Smurf1组）三组中细胞的增殖活性。4.25g/cm~2静压力作用24h后,采用RT-q PCR和Western Blot技术检测过表达Smurf1对HGFs-PLGA中TGF-β1、Smad3、p-Smad3、Smad7及Smurf1表达的影响。结果:1.离体的牙龈组织经组织块培养法成功获得HGFs原代细胞,进行传代纯化后性状稳定,取第4-6代接种于PLGA支架上,成功构建HGFs-PLGA三维培养模型。2.25 g/cm~2静压力分别作用于HGFs-PLGA 12h、24h、48h后,细胞中TGF-β1的m RNA和蛋白表达较0h组均显著升高,且在24h组达到峰值（P0.05）,而NC组在转染第3天开始细胞增殖能力较另外两组均显著下降（P<0.05）。4.Smurf1组HGFs-PLGA在25g/cm~2静压力作用24h后,Smurf1的m RNA和蛋白表达相较于Control组和NC组均显著增加（P<0.05）,而TFG-β1、p-Smad3和Smad7的m RNA和蛋白表达相较于Control组和NC组均显著下降（P<0.05）。结论:1.静压力可以刺激HGFs-PLGA高表达TGF-β1、p-Smad3和Smad7,TGF-β1/Smads信号通路参与了HGFs-PLGA在力学刺激下的信号传导。2.慢病毒本身对HGFs-PLGA的增殖活性具有抑制作用,但Smurf1能促进细胞增殖。3.Smurf1能抑制静压力下HGFs-PLGA中TGF-β1、p-Smad3和Smad7的表达,过表达Smurf1对静压力下HGFs-PLGA中TGF-β1/Smads信号传导起负调控作用。
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