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为进一步了解和探索辐射在唐菖蒲育种中对唐菖蒲主要农艺和商品性状以及基因组的影响,本文通过对三个唐菖蒲品种“豪华”、“江山美人”、“新秀”种球分别经过0GY、25GY、50GY、75GY、100GY、150GY剂量<60>Co-γ射线照射后,植入大田,对各品种和处理进行了形态指标测定以及采用RAPD技术对变异唐菖蒲植株基因进行了研究,在唐菖蒲辐射育种适宜剂量、处理条件、突变频率和突变谱等方面进行了较系统的研究。取得了如下结果:
1.对生物学特性的研究结果表明不同剂量<60>Co-γ射线辐射对唐菖蒲各形态指标均产生了影响,并且变异程度和辐射剂量成正相关,即随着剂量的增大唐菖蒲各性状的变异程度也随之增大。种球萌发方面,各品种小剂量25-75GY辐射促使种球发芽时间提前,且对发芽率影响不大;但是总体随着剂量增大,发芽率有所降低。低剂量25GY辐射促进了植株株高、花序长等生长指标,辐射剂量在75GY左右,辐射变异率较高,在辐射剂量高于100GY时各指标均产生明显下降趋势。
2.建立了适用于唐菖蒲RAPD分子标记的反应体系,其优化体系为:引物(10μg/L,)20ng,dNTPs(2.5mmol/L)2.0μL,MgCl<,2>(25mmol/L)2.2μL,10<*>Reaction Buffer 2.5μL,Taq酶0.3μL,模板DNA(20μg/L)20ng,ddH<,2>O15μL。优化其扩增程序:94℃、10min, 1循环; 94℃、30s, 37℃、60s,72℃、90s,40循环;72℃、5min,1循环; 4℃保存。利用该体系对田间变异植株和对照进行了分析、研究。从12种引物中筛选出了9种引物其扩增产物表现出明显的多态性差异。
3.RAPD结果表明,经过不同辐射剂量处理获得的变异唐菖蒲在DNA水平上存在多态性差异。分析了变异株间遗传物质的差异,并讨论了RAPD的可靠性。各品种:“豪华”基因相似系数在50%-92.3%之间,单匹配系数在0.333-0.464之间;“江山美人”基因相似系数在60%-93.3%之间,单匹配系数在0.357-0.469之间;“新秀”基因相似系数在44.5%-94.1%之间,单匹配系数在0.344-0.472之间。各品种对辐射的敏感度不同,品种新秀对辐射较为敏感。