毛细管电泳在蜚蠊制剂化学成分分析中的应用研究

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蜚蠊药用历史久远,我国现存最早的药学专著《神农本草经》,将之列为中品,属于能治病的中药。有研究表明,氨基酸和各种昆虫神经肽是存在蜚蠊机体内的主要化学成分。因此,本论文采用毛细管电泳及其联用技术对蜚蠊制剂中多肽成分及氨基酸成分进行定性定量分析和指纹图谱研究。论文共四章,主要内容如下:第一章建立了一种同时分离5种蜚蠊多肽的毛细管区带电泳(CZE)分离检测新方法。在检测波长为214 nm,分离电压25 kV,压力进样0.5 psi×8 s的条件下,以含有80 mmol/L乙酸-80 mmol/L乙酸铵(pH3)为运行缓冲液,5种多肽在15min内达到基线分离。并用该方法对康复新液的多肽4和美洲大蠊精粉的多肽5进行测定,加样回收率在76.73%~109.78%之间。但在蜚蠊制剂实际样品测定中仅测定到多肽4和多肽5,其它多肽可能因其含量低,方法检测灵敏度不够,下一章拟将CE与在线富集技术联用进一步测定蜚蠊制剂中的多肽。第二章利用两种CZE-在线富集联用新方法(CZE-LVSS和CZE-FESI)对蜚蠊制剂中的多肽进行测定。运行缓冲液:80 mmol/L乙酸-80 mmol/L乙酸铵(pH3)。最佳LVSS条件为:分离电压20kV,进样时间:3 psi×46 s,堆积时间:0.2 min,堆积电压:-20 kV。最佳FESI条件为:分离电压20kV,进样时间45 s,进样电压10 kV,样品基质中甲醇含量30%(v/v)。经LVSS和FESI在线富集后,在康复新液和美洲大蠊精粉中新检测到多肽1、多肽2、多肽3,加样回收率在77.22%~127.98%之间。第三章利用反向毛细管胶束电动色谱法直接测定亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸、脯氨酸5种氨基酸。在检测波长为200 nm,分离电压20 kV,压力进样3 psi× 5 s的条件下,以含有0.4 mmol/L十六烷基三甲基氯化铵(CTAC),6%(v/v)乙腈的40 mmol/L KH2PO4-110 mmol/L NaOH(pH=11)为运行缓冲液,5种氨基酸在10min内达到基线分离,检测限最低可达到0.07 μg/mL。并用该方法对康复新液中所含人体必需氨基酸亮氨酸、缬氨酸进行测定,加样回收率在77.41%~112.6%之间。第四章利用CZE建立了一种新的康复新液指纹图谱分析方法。实验最佳CZE分离条件:以80 mmol/L乙酸-80 mmol/L乙酸铵(pH=3)为运行缓冲液,分离电压20 kV。对不同产家生产的10批康复新液进行测定,20 min内完全分离,并通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版本进行指纹图谱分析。得到10批指纹图谱的相似度均大于0.99,符合“中药指纹图谱技术要求”。本论文采用毛细管电泳及其联用技术对蜚蠊制剂中多肽成分及氨基酸成分建立分离检测新方法,并将其成功用于蜚蠊制剂实际样品的分析,同时建立相关指纹图谱分析方法,实验结果令人满意,具有深入开发的价值。
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