瘦素受体表达对HeLa细胞生物学功能影响的研究

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宫颈癌是女性生殖系统中最常见的恶性肿瘤。目前已有的治疗手段,对中晚期病人效果不佳。研究发现,在肝癌、乳腺癌和星形胶质瘤中瘦素受体(Leptin recepter, LEPR or CD295)对癌细胞的迁移能力、克隆形成能力和抗肿瘤药物耐受等生物学特征有影响本课题主要探讨CD295蛋白对HeLa细胞生物学功能的影响。实验通过流式细胞仪表型检测和免疫荧光检测,发现CD295是HeLa细胞的一种膜表面蛋白;将CD295作为细胞筛选标志物,用流式仪细胞分选获得CD295+HeLa细胞。用CD295干扰质粒载体和空载体SD1211分别转染HeLa细胞,瞬时转染HeLa细胞用抗生素G41 8筛选建立CD295干扰质粒载体稳定转染细胞系(pGCsi-CD295)和空载体稳定转染细胞系(control)。随后,本研究对CD295蛋白表达量不同的四种细胞系:CD295+ HeLa细胞、pGCsi-CD295 HeLa细胞、未处理的HeLa细胞和空载体稳定转染细胞系(control),进行了癌细胞生物学功能的差异性比较,包括通过平板克隆形成能力检测克隆形成能力、平板划痕检测迁移能力、Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力、MTT法检测细胞对紫杉醇的敏感性、流式细胞仪检测细胞周期变化等。实验结果显示,CD295的高表达使细胞具有更强的克隆形成能力、迁移能力、侵袭能力、耐受肿瘤药物紫杉醇的能力、并显著影响HeLa细胞的细胞周期分布。由此我们推断CD295表达量增加会增强HeLa细胞的癌干性。
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