我国是养殖虾的主要生产国之一,就2003年的海水养殖虾总产量就已达到了全球总量的31%。但由于集约化养殖的发展,养殖规模的盲目扩大和养殖水域的过度开发,破坏了水体生态平衡,引起病原菌的大量繁殖给我国养殖业带来了巨大的经济损失。因此采取何种有效的方法来预防控制这些疾病已成为热点问题。近几年来免疫多糖类免疫促进剂的研究及应用备受学者们的关注,而酵母细胞壁多糖已经被证明是一种良好的免疫促进剂,它不仅能够加快虾蟹免疫器官的发育,又能激发机体非特异性免疫反应。因此关于酵母细胞壁多糖在水产养殖实际应用中的给药方法、适宜使用量及处理时间都是目前研究的热点。本研究课题采用浸浴和注射两种给药方法,分析比较酵母细胞壁多糖在不同浓度和不同时间对罗氏沼虾体内心脏、肝脏、鳃和肌肉4种组织中酸性磷酸酶(ACP)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和超氧化物歧化酶(SOD)等4种免疫相关同工酶的作用,以进一步探讨这种免疫促进剂对罗氏沼虾体内免疫系统的作用机理,并为酵母细胞壁多糖在虾类等水产养殖生产实践中的应用提供参考。1、不同浓度酵母细胞壁多糖浸浴对罗氏沼虾免疫相关同工酶的影响将酵母细胞壁多糖配制成0.00mg/L、31.25 mg/L、62.50mg/L、125.00mg/L和250.00mg/L 5个浓度,对罗氏沼虾进行浸浴处理120h后,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳方法及酶活力测定方法来探讨酵母细胞壁多糖对罗氏沼虾心脏、肝脏、鳃和肌肉4种组织中几种免疫相关同工酶(酸性磷酸酶(ACP),过氧化物酶(POD),多酚氧化酶(PPO)和超氧化物歧化酶(SOD) )的影响。结果如下:ACP、POD、PPO和SOD 4种免疫相关酶在所取得的4种组织中均有分布,且不同组织各种酶的表达不同,具有很明显的组织特异性。经不同浓度的酵母细胞壁多糖浸浴处理后,罗氏沼虾4种组织中的ACP等4种同工酶酶谱变化主要表现在酶带颜色深浅上,无酶带的新增和缺失现象,各组织中的各同工酶酶带数保持不变。并且不同浓度的酵母细胞壁多糖浸浴处理明显提高了罗氏沼虾体内鳃、肝脏和心脏组织中的ACP酶活力,鳃中的POD和PPO酶活力,心脏和鳃中的SOD酶活力,除鳃中的SOD酶活力在62.50mg/L浓度浸浴时增强作用最显著外,其余均在125.00mg/L浓度浸浴时增强作用最显著。因此,本实验结果表明浸浴酵母细胞壁多糖能明显提高罗氏沼虾体内的免疫功能,尤其对鳃中的4种免疫相关酶的增强作用最明显,且在酵母细胞壁多糖浓度为125 .00mg/L效果最佳。2、酵母细胞壁多糖浸浴不同时间对罗氏沼虾免疫相关同工酶的影响利用上述实验确定的最佳浓度(125.00 mg/L)酵母细胞壁多糖作为免疫激活剂对罗氏沼虾进行浸浴处理,分别在0h、48h、96h、144h和196h取虾体心脏、肝脏、鳃和肌肉组织,测定其ACP、POD、PPO和SOD的活性并结合聚丙烯酰胺凝胶电泳酶谱分析发现,经酵母细胞壁多糖浸浴不同时间后,罗氏沼虾4种组织中的POD、PPO和SOD同工酶图谱变化主要表现在酶带颜色深浅上,而ACP酶谱不但在颜色上有一定的变化,在浸浴时间达到144h后,心脏和肝脏组织中均新增了一条ACP-4酶带。酶活力测定结果与酶谱结果相一致,并且都显示在浸浴时间达144h后,各组织中的ACP活力,鳃和肝脏中POD活力以及心脏组织中的SOD活力均达到酶活力峰值,与相应对照组具有显著性差异。鳃和肝脏中PPO虽在浸浴96h后达到酶活力峰值,但在144h时酶活力仍维持较高水平,差异依然显著。因此本实验结果表明,对罗氏沼虾浸浴酵母细胞壁多糖的有效作用时间为96h至144h。3、不同浓度酵母细胞壁多糖注射对罗氏沼虾免疫相关同工酶的影响对罗氏沼虾注射不同浓度(0.0%、1.0%、2.0%和3.0%)的酵母细胞壁多糖溶液0.1ml/尾,72h后取虾心脏、肝脏、鳃和肌肉组织,测定其ACP、POD、PPO和SOD的活性并结合电泳酶谱来分析研究注射酵母细胞壁多糖对罗氏沼虾免疫系统的影响。结果发现,在注射浓度为2.0%时,4种免疫酶活力均有明显提高,酶带颜色明显加深或变宽,尤其在肌肉组织中的变化最显著,表现为其ACP、PPO和SOD活力均达到峰值,分别为38.995 U/L、0.532U和12.297 U/mg,且都与相应对照组差异显著。心脏组织中的ACP活力和肝脏组织中的POD活力也达到酶活力峰值,分别为89.131 U/L和22.517 Eu/(g.min),也均显著高于对照组。由此表明,采用2.0%的酵母细胞壁多糖对罗氏沼虾进行腹腔注射处理效果最佳。4、注射酵母细胞壁多糖不同时间后对罗氏沼虾免疫相关同工酶的影响利用上述最佳注射浓度(2.0%)的酵母细胞壁多糖作为免疫激活剂对罗氏沼虾进行腹腔注射处理,分别在24h,48h,72h,96h和120h取肝脏、心脏和肌肉组织,测定其ACP和POD的活性。结果发现,心脏和肌肉组织中的ACP活力均在72h后显著提高且均达到峰值,分别为93.0U/L和34.5 U/L。而肝脏组织中的ACP活力在96h才有明显提高,达到峰值284U/L。3种组织中的ACP活力自从上升后均一直维持较高水平,直到120h后依然显著高于对照组。由过氧化物酶(POD)活性测定数据显示,经注射酵母细胞壁多糖后,沼虾心脏和肝脏中的POD活力分别于72h和48h后显著提高且达到峰值,分别为5.38 Eu/(g.min)和23.16 Eu/(g.min),均显著高于对照组水平,且两种组织中的POD活力上升后均维持了24h,分别于96h和72h仍然显著高于对照组。肌肉组织中的POD酶活力虽有提高但变化不明显。总之,实验结果表明酵母细胞壁多糖可以激活沼虾的免疫系统,增强其抵抗病毒的能力,并且对沼虾注射酵母细胞壁多糖48h后就可以起到明显的免疫增强作用,且可维持至120h。综上所述,采用浸浴和注射的方法均能诱导罗氏沼虾的体液免疫反应,提高各种免疫酶活力,从而增强虾体防病抗病能力。浸浴的给药方法对虾体的作用比较温和但见效较慢,本实验用125.00mg/L的酵母细胞壁多糖浸浴罗氏沼虾96h后才有明显的免疫增强效果,144h时增强效果最佳;而注射的给药方法对虾体的刺激较大但是作用见效相对较快,本实验用2.0%的酵母细胞壁多糖注射罗氏沼虾48h后就使沼虾体内的免疫力有了明显的提高,且能维持至120h。