酪蛋白糖巨肽的分离纯化及其功能的研究

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酪蛋白糖巨肽(Casein Glycomacropeptide, CGMP)是用凝乳酶(或胃蛋白酶)水解K-casein中Phe105-Met106的肽键所得到的具有64个氨基酸残基(106-109)的糖肽。CGMP具有不同的糖基化和磷酸化结构。它具有许多的生理活性功能和独特的营养特性。可以广泛的添加于保健食品和医药品。例如结合霍乱毒素和大肠杆菌毒素;抑制细菌和病毒的粘附作用;抑制胃液分泌;促进双歧杆菌增殖;调节免疫系统等。本文研究了凝乳酶水解酪蛋白制备CGMP的工艺,并发现了粗品CGMP对口腔致病菌-变形链球菌具有抑制粘附,生长,产酸作用;并对粗品CGMP进行了分离纯化的研究。本实验对制备CGMP的工艺进行了研究,并通过间苯二酚-盐酸法,以CGMP标准品为对照,进行水解产物中CGMP的检测,实验结果表明:水解产物中CGMP呈蓝紫色。进而证明了该水解产物中确有CGMP存在。随后,实验通过间苯二酚-盐酸法,测定水解产物中唾液酸含量,并对照CGMP标准曲线,推算出水解产物中CGMP含量为50.85%。同时采用SDS-PAGE电泳,对水解产物中的CGMP进行了鉴定,并考察其分子量的分布。实验结果表明水解产物中CGMP分子量约为20kDa左右。对粗品CGMP的功能进行了研究。采用滤纸片扩散法,研究粗品CGMP抑制变形链球菌生长的特性。实验发现:含有粗品CGMP的滤纸片周围抑菌圈清晰透明,证明粗品CGMP对变形链球菌具有明显的抑制作用。采用测pH值的方法,研究了粗品CGMP抑制变形链球菌产酸的特性。实验表明:粗品CGMP对变形链球菌的产酸具有明显的抑制作用。采用酶连荧光法,研究粗品CGMP抑制变形链球菌粘附的特性。实验表明:粗品CGMP对变形链球菌的产酸具有明显的抑制作用。使用DEAE纤维素-52法和反相高效液相色谱(RP-HPLC)先后对粗品CGMP进行分离,得到了具有抑菌活性的纯品CGMP。
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