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目的:以天然中草药肉苁蓉(Cistanche Herba)中主要成分之一的松果菊苷(Echinacoside,ECH)作为实验材料,通过体外作用于肾癌细胞(renal carcinoma cell,RCC),观察松果菊苷对肾癌细胞形态的作用,并进一步分析该药物对肾癌786-O细胞增殖,凋亡以及细胞活力和迁移能力的作用,从细胞水平阐述松果菊苷抗肾癌的作用;同时研究松果菊苷对肾癌786-O细胞内Caspase级联通路和抗凋亡蛋白BCl-2的影响,探讨其影响肾癌786-O细胞的作用靶点,从分子水平阐明松果菊苷对肾癌786-O作用的分子机制,探讨松果菊苷在细胞和分子水平上抑制肾癌细胞的功能及其作用机制,为肾癌的新药开发提供基础数据。方法:分别以含松果菊苷浓度为0,1.25,2.5,5,10,20,40μmol/L体外培养肾癌786-O细胞24 h,用MTT法检测肾癌786-O细胞的增殖情况,同时测量松果菊苷对肾癌786-O细胞的半数抑制率(IC50),并在靠近该数值的基础上选取实验组松果菊苷的浓度继续以下实验。不同浓度的松果菊苷(0,1,2,3,4,5,6μmol/L)作用于肾癌786-O细胞24 h和36 h后,MTT法检测不同受试药物浓度对肾癌786-O细胞的影响;使用Transwell体外迁移实验,来检测在松果菊苷(0,1,2,3,4,5,6μmol/L)作用于肾癌786-O细胞24 h后,对肾癌786-O细胞迁移能力的影响;进一步通过RT-PCR实验检测松果菊苷对肾癌786-O细胞内BCl-2、Caspase-3和Bax mRNA的相对表达量;Western blot实验检测不同受试药物浓度对肾癌786-O细胞内抑制凋亡效应蛋白BCl-2和凋亡效应蛋白Caspase-3表达的影响。结果:(1)不同浓度松果菊苷对肾癌786-O细胞的增殖抑制率随着药物浓度的升高逐渐升高,且通过实验数据测得松果菊苷对肾癌786-O细胞的半抑制浓度IC50为5.443μmol/L;(2)显微镜下进行观察不同浓度的松果菊苷处理肾癌786-O细胞的形态,发现与未进行药物处理的肾癌786-O细胞相比,药物处理组的细胞形态发生变化,生长状态变差,且细胞数目明显减少;(3)药物处理组可降低肾癌786-O细胞的生存率,极显著促进肾癌786-O细胞的凋亡(P<0.01),药物处理组对肾癌786-O细胞进行诱导24 h和36 h后,细胞的增殖率随着药物浓度的升高而呈现下降趋势,有明显的抑制作用(P<0.01),可引起细胞凋亡,与对照组相比,药物处理组细胞增殖率呈现出药物浓度依赖性的特点;药物处理组作用肾癌786-O细胞24 h后,与对照组相比,肾癌786-O细胞的迁移能力有明显下降的趋势(P<0.01);(4)根据RT-PCR所得出的数据显示,与对照组相比较,不同浓度的药物处理组可显著促进细胞内凋亡切割蛋白Caspase-3、凋亡蛋白Bax的mRNA表达水平(P<0.05),明显抑制抗凋亡蛋白BCl-2的mRNA表达水平(P<0.05);(5)通过Western Blot实验分析,与对照组比较,不同浓度的松果菊苷处理组中细胞内BCl-2蛋白的表达含量显著下调,但细胞内Caspase-3蛋白的表达含量具有明显的上调趋势,并且呈现药物浓度依赖关系,表明松果菊苷通过激活Caspase-3和BCl-2引起了肾癌786-O细胞程序性死亡。结论:(1)松果菊苷能够以浓度依赖方式显著抑制肾癌786-O细胞的增殖活力,提高细胞凋亡率。(2)松果菊苷可以明显降低肾癌786-O细胞的迁移能力;(3)松果菊苷可以进一步诱导肾癌786-O细胞的凋亡。在此过程中,Bax基因表达水平上调,凋亡效应蛋白Caspase-3表达量上调,同时抑制凋亡效应蛋白BCl-2表达量下调,表明Bax、Caspase-3和BCl-2参与松果菊苷诱导的肾癌786-O细胞的凋亡。松果菊苷诱导的肾癌786-O细胞的凋亡是通过影响线粒体通路和Caspase级联反应来完成的。