论文部分内容阅读
近年来,我国食品安全问题频发,严重影响人民的日常生活和健康,已成为继人口、资源、环境后的第四大社会问题。因此,建立健全食品安全监管体制,发展快速、可靠、灵敏的检测技术尤为重要。免疫分析检测技术以其方便快捷、成本低廉、无需大型设备等优点,被广泛应用于我国农产品安全检测中。但是传统免疫分析检测技术多依附于天然酶免疫标记物的活性,使用及储藏受到温度、pH等环境因素的限制。本文以盐酸克伦特罗（CL）和三聚氰胺为研究对象,以酶联免疫吸附分析检测技术原理为基础,通过对Fe3O4磁性纳米粒子类过氧化物酶催化活性的探索,明确了Fe3O4磁性纳米粒子类酶活性在农产品安全检测中的应用潜力,研究建立了基于Fe3O4磁性纳米粒子的ELISA检测方法及化学检测方法,为解决天然酶易失活、成本高等缺点,促进磁性纳米粒子类酶活性在农产品安全检测中的应用提供科学依据和技术支持。主要研究结果如下:（1）采用共沉淀法制备Fe3O4磁性纳米粒子,经APTES修饰后Fe3O4磁性纳米粒子仍具有类过氧化物酶活性,最适反应条件为:TMB浓度3.10mM,H2O2浓度0.835M,温度40℃,pH值为4,氨基化修饰后Fe3O4磁性纳米粒子对TMB和H2O2的Km值分别为0.836和23.466。（2）新制备的金磁微粒粒径在50nm左右,可见光最大吸收峰在564nm左右。以金磁微粒与抗体比例,金磁微粒与抗体反应时间及金磁微粒与抗体反应温度为变量,依据均匀设计表,研究金磁微粒对CL抗体的纯化效果。最后选择金磁微粒与抗体比例16:1,反应时间12h,反应温度20℃作为最优纯化条件。经金磁微粒纯化后,抗BSA抗体明显减少,LOD为0.189 mg/L,下降6.90%;IC50为2.294 mg/L,下降24.37%,检测灵敏度有很大提高。（3）确定了Fe3O4磁性纳米粒子抗体复合物制备过程中的最佳抗体包被稀释度为1:500。通过方阵实验确定了包被原及Fe3O4磁性纳米粒子抗体复合物的最佳工作稀释度为1:3200和1:1600。建立基于Fe3O4磁性纳米粒子的CL残留检测标准曲线,拟合得到方程:B/B0=1/[1+（x/2.178）0.743],（R2=0.9951）。其线性检测范围为:0.337-14.07 mg/L,LOD（IC10）为0.113 mg/L,抑制中浓度IC50为2.178 mg/L。样品添加回收率为88-105%,符合农产品安全检测要求。（4）通过对Fe3O4磁性纳米粒子催化TMB-H2O2反应条件的摸索,确定了其用于三聚氰胺检测的最佳反应条件为:6.20mM TMB,0.334M H2O2,反应温度30℃,pH 5以及反应时间6min。建立基于Fe3O4磁性纳米粒子的三聚氰胺化学检测方法及标准曲线:Y= -0.3087X+1.401,（R2=0.9476）。该方法对牛奶及奶粉的添加回收率都较好,对牛奶的添加回收率为:86-104%,对奶粉的添加回收率为:96-116%。基质干扰效应结果显示,牛奶中可能存在的无机盐和微量元素对该检测方法的干扰率均小于5%。