【摘 要】
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目的:体内观察五味子醇提液(schisandra chinensis extract,SE)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠(db/db)氧化应激及凋亡的保护作用,并进一步探讨其可能的作用机制。方法:选取10只9周龄雄性db/m小鼠和10只同周龄同源雄性db/db小鼠随机分为正常对照组(C+V组)、五味子醇提液对照组(C+SE组)、模型组(DN+V组)、五味子醇提
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目的:体内观察五味子醇提液(schisandra chinensis extract,SE)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠(db/db)氧化应激及凋亡的保护作用,并进一步探讨其可能的作用机制。方法:选取10只9周龄雄性db/m小鼠和10只同周龄同源雄性db/db小鼠随机分为正常对照组(C+V组)、五味子醇提液对照组(C+SE组)、模型组(DN+V组)、五味子醇提液治疗组(DN+SE组),每组5只。五味子醇提液对照组和五味子醇提液治疗组分别以五味子醇提液5ml/kg/d灌胃,正常对照组和模型组灌以等量双蒸水,连续给药六周。每隔三周记录体重、血糖及尿量,6周后处死小鼠,收集肾组织标本。肌酐和尿素氮试剂盒检测血肌酐(serum creatinine,Scr)和尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)的含量,HE染色和PAS染色观察小鼠肾脏病理改变,脂质过氧化试剂盒测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量,免疫组化检测肾组织4-羟基壬烯醛(4-Hydroxynonenal,4-HNE)的表达;Western Blot检测肾组织中抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax 的表达,RT-PCR 检测 Nrf2、HO-1、CAT、GPX1 及 Bcl-2、Bax mRNA 的表达量。结果:血糖、体重、24h尿微量白蛋白排泄率结果显示,与C+V组相比,DN+V组和DN+SE组体重、血糖和24h尿微量白蛋白排泄率明显升高,与DN+V组相比,DN+SE组血糖和24h尿微量白蛋白排泄率明显下降,但DN+SE组体重与DN+V组并无明显差异。血Scr与BUN结果显示,与C+V组比较,DN+V组血Scr和BUN增高,DN+SE组与DN+V组比较,血Scr和BUN均有不同程度的下降,但血Scr差异无统计学意义。HE染色结果显示,C+V组和C+SE组小鼠肾组织结构正常;DN+V组小鼠肾间质发现炎性细胞浸润,肾小管管腔扩张、上皮细胞脱落等;DN+SE组病变明显轻于DN+V组。糖原PAS结果显示,C+V组和C+SE组肾组织结构未发生改变;DN+V组肾小球明显增大,系膜细胞增生、基质增宽,肾小球基底膜增厚;DN+SE组肾组织病理改变较DN+V组显著变轻。脂质过氧化试剂盒结果显示,与C+V组相比,DN+V组和DN+SE组MDA显著增高,与DN+V组相比,DN+SE组MDA含量显著降低。免疫组化实验结果显示,与C+V组比较,DN+V组和DN+SE组4-HNE在肾组织内表达明显增多,与DN+V组相比,DN+SE组肾组织中4-HNE表达减少。Western blot结果显示,与C+V组相比,DN+V组Nrf2、HO-1蛋白和Bcl-2/Bax 比值水平明显降低,Caspase-3蛋白水平上升,与DN+V组比较,DN+SE组Nrf2、HO-1蛋白和Bcl-2/Bax 比值表达增高,Caspase-3蛋白表达下降。RT-PCR结果显示,与C+V组比较,DN+V组Nrf2、HO-1、CAT、GPX1的表达下降,Bcl-2/Bax 比值显著降低,与 DN+V 组相比,DN+SE 组 Nrf2、HO-1、CAT、GPX1 表达上升,Bcl-2/Bax比值增高。结论:五味子醇提液对糖尿病肾病小鼠有一定的保护作用。其机制可能与上调抗氧化因子Nrf2及其下游基因,增强机体抗氧化能力和上调抗凋亡因子Bcl-2与下调促凋亡因子Bax和Caspase-3,阻碍线粒体凋亡途径有关。
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