目的:DLBCL是一类独立疾病,其临床表现、病理特点、分子亚型、免疫分型特征和临床预后都存在明显的异质性。根据基因表达谱(GEP)将DLBCL分为生发中心(GCB)亚型(GCB-DLBCL),活化B细胞样(ABC)亚型(ABC-DLBCL),还有约15%～30%的患者无法分类的第三型。通过免疫组织化学检测CD10、Bcl-6、MUM1三者表达情况(Hans分型),分为生发中心(GCB-DLBCL)和非生发中心(non-GCB)亚型(non-GCB-DLBCL)。尽管在美罗华时代,R-CHOP方案极大改善了DLBCL患者的预后,但ABC亚型患者依然预后较差,DLBCL的5年总生存率(OS)仅为60-70%,GCB-DLBCL约为75%,ABC-DLBCL约为35%。仍有40%-50%的患者对标准治疗方案不敏感,治疗过程中产生复发性耐药而最终导致死亡,其机制尚不明确。这部分患者的中位生存期仅为4个月,中位无进展生存期仅为3个月。因此,从分子水平更全面地了解DLBCL的致病机制,寻找DLCBL早期诊断、疗效及预后评估的特异性分子靶标,对DLBCL的早期诊断、提高疗效和改善预后具有重要意义。随着科技迅猛发展,二代测序技术(NGS)可实现全基因组、全外显子、转录组测序,确定DLBCL内重现性基因突变。不同亚型涉及不同的基因突变,如GCB-DLBCL常见EZH2、GNA13和Bcl-2突变,而ABC亚型,主要涉及BCR/NF-κB信号通路相关基因突变,其中My D88及CD79B是该信号通路上的两个关键基因,也是目前的热点基因。据最近新英格兰杂志报道,对574例DLBCL患者进行回顾性分析,根据DLBCL基因型、表观遗传学及临床特征的不同从分子水平将DLBCL分为四种亚型:MCD型、BN2型、N1型及EZB型,其中MCD型以My D88和CD79B基因突变为主要特征。这些突变促使NF-κB抗凋亡信号通路及B细胞受体(B Cell Recptor,BCR)信号通路的异常激活,细胞的凋亡受阻,进而促进肿瘤生长。其中CD79B突变通过增加淋巴细胞表面BCR的表达,并使BCR负向调控信号失效,继而可导致NF-κB信号通路的慢性持续性激活,而My D88 L265P突变可以增强白介素-1受体相关激酶(IRAK1,4)的活性,激活NF-k B信号传导。据最近报道,约38.7%-94%的DLBCL高表达My D88,且与My D88 L265P突变无关。因此我们推测,DLBCL中可能存在其他机制调控My D88的表达,具体机制值得研究。微小RNA(micro RNA,mi RNA)是长度约为18-25个核苷酸的小分子非编码RNA,作为重要的表观遗传调控因子广泛存在于生物界,主要通过与靶基因m RNA的3’-非编码区(3’-UTR)结合,导致m RNA降解或翻译抑制,在细胞的分化、发育、增殖、凋亡等各阶段发挥转录后水平的表观遗传修饰作用。mi R-525-5p作为最新报道的微小mi RNA,在不同肿瘤中具有促癌和抑癌作用。本课题组前期利用mi RNA芯片技术,在DLBCL组织mi RNA表达谱中发现mi R-525-5p表达下调极为显著。随后在Target Scan7.0、mi RWalk3.0数据库预测结果中发现mi R-525-5p与My D88的3’端非翻译区(3’UTR)靶相结合。目前,mi R-525-5p与My D88的联系尚无研究报道,二者在DLBCL中的作用尚不清楚。本研究在课题组前期研究成果基础上,结合了数据库信息检索挖掘和分子生物学实验。第一部分旨在检测DLBCL组织中mi R-525-5p、My D88蛋白表达水平,分析二者的联系及临床病理意义,第二部分检测My D88 L265P、CD79B的突变水平、分析二者突变与NF-κB信号活化的关系,为DLBCL寻找新的作用靶点。方法:复习并筛选大理大学第一附属医院病理科2008年-2019年首诊为DLBCL和RH的病例。第一部分:(1)mi RWalk3.0和Targetscan数据库双向预测mi R-525-5p的结合靶基因以及My D88的靶mi RNA;(2)IHC检测My D88蛋白表达;(3)q PCR检测mi R-525-5p表达。第二部分:(1)IHC检测NF-κB/p65蛋白表达;(2)My D88、CD79B第五外显子的PCR扩增,并测序。结果用SPSS17.0进行统计学分析(p<0.05差异具有统计学意义)。结果:第一部分:(1)mi RWalk3.0及Targetscan数据库双向检索出My D88基因3’UTR有mi R-525-5p的结合位点;(2)71.4%(55/77)DLBCL中My D88高表达,显著高于RH组(23.3%,7/30),non-GCB和Bcl-2阳性组DLBCL My D88免疫组化评分显著高于GCB组和Bcl-2阴性组,My D88表达水平与IPI评分、Ki-67增殖指数呈线性正相关,与预后风险分级和临床分期呈等级正相关,高表达My D88与DLBCL患者不良预后有关,与患者的性别、年龄、发病部位无关。(3)mi R-525-5p在DLBCL组表达水平明显低于RH组,mi R-525-5p表达与临床分期、My D88、Ki-67、Bcl-2的表达呈负相关,低表达mi R-525-5p与患者不良预后有关,与年龄、性别、发病部位、免疫分型和IPI评分、风险分级无关。第二部分:(1)35.1%(27/77)的DLBCL高表达NF-κB/p65,与DLBCL患者non-GCB、My D88表达、不良预后有关,与其它临床病理参数无相关性。(2)My D88 L265P和CD79B突变率分别为5.56%(3/54)和8.33%(1/12),与My D88、NF-κB/p65蛋白表达及患者临床病理参数无统计学关联。结论:(1)My D88可能是mi R-525-5p的靶基因;(2)mi R-525-5p与My D88/NF-κB通路的异常可能与DLBCL发生发展有关;(3)在除外免疫豁免部位的全身性DLBCL中,My D88 L265P和CD79B突变率低,不适合作为其分子指标。