目的:肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)是许多慢性肝病共有的病理过程,肝细胞发生坏死和炎症刺激时,细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的增生与降解失去平衡,从而导致肝脏内纤维结缔组织异常沉积。目前认为肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)激活是肝纤维化发生发展的核心环节。血红素氧合酶(heme oxygenase, HO)是血红素代谢途径中的限速酶,HO-1是HO的一种同工酶,作为体内的一种保护蛋白,HO-1及其催化产物胆绿素、胆红素和CO在体内均有显著的抗炎、抗细胞增殖及调节细胞因子表达等重要作用。近年来的研究显示,在肝移植、急性肝损伤和缺血再灌注损伤等多种肝脏疾病中,HO-1对肝细胞均具有保护作用,但对于HO-1与肝纤维化的相关研究甚少。本实验目的通过建立免疫性肝纤维化动物模型,应用HO-1的诱导剂钴原卟啉(cobalt protoporphyrin, CoPP)增加HO-1蛋白的表达,来探讨HO-1对肝纤维化发生发展的影响,进一步揭示HO-1的作用机理,为临床有效地预防和治疗肝纤维化提供实验及理论依据。方法:取健康雄性SD大鼠52只,随机分成三组:正常对照组12只(N组)、肝纤维化组20只(F组)和钴原卟啉组20只(Co组)。F组应用人血清白蛋白建立免疫性肝纤维化模型。Co组模型制备同F组,在尾静脉攻击同时给予CoPP腹腔注射。N组给予相应量的生理盐水注射。攻击后6周将所有大鼠处死,取血、取肝。通过Western blot方法、免疫组织化学方法观察HO-1蛋白表达;采用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase , AST)水平反映肝功能;采用γ放射免疫计数器检测血清透明质酸酶(hyaluronic acid, HA)、层粘蛋白(laminin, LN)、Ⅲ型前胶原肽(typeⅢprecollagen, PCⅢ)、Ⅳ型胶原(typeⅣcollagen,Ⅳ-C)的水平反映肝纤维化程度;HE染色观察肝纤维组织增生与分布情况,观察成纤维细胞增胜程度,并观察肝细胞和炎细胞的变化;VG染色观察Ⅰ型胶原增生程度;Foot网染观察Ⅲ型胶原增生程度;镜下观察除汇管区、纤维间隔以外肝细胞间梭形细胞的数目。结果:1.Western blot方法显示F组大鼠肝组织HO-1蛋白含量较N组增加(P<0.01),Co组较F组增加(P<0.05)。免疫组织化学方法显示F组较N组HO-1染色强度增加,范围扩大,而Co组呈现出均匀一致的强染色。2.血清学肝纤维化指标显示与N组比较,F组肝纤维化指标HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C均明显升高,有显著性差异(P<0.01)。与F组比较,Co组肝纤维化指标HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C明显降低(P<0.05)。通过HE染色、VG染色、Foot网染结果显示CoPP的给予可以使肝纤维化程度减轻。3.血清学ALT、AST结果显示给予CoPP腹腔注射后大鼠血清ALT、AST升高水平较F组下降(P<0.01)。HE染色结果显示Co组肝细胞损伤程度减轻(P<0.01)。4.通过镜下对除汇管区、纤维间隔以外肝细胞间梭形细胞数目的比较显示Co组可使增多的细胞数减少(P<0.05)。5.通过对汇管区及中央静脉炎性细胞的观察,Co组仅见少量炎性细胞。结论:1.免疫性肝纤维化大鼠肝组织HO-1蛋白表达增加,CoPP可诱导HO-1进一步增多,抑制了肝纤维化的发生发展。2.在免疫性肝纤维化形成过程中,CoPP诱导HO-1增多可保护肝细胞。3.在免疫性肝纤维化形成过程中,CoPP诱导HO-1增多可抑制炎性细胞的浸润。4.在免疫性肝纤维化形成过程中,CoPP诱导HO-1增多可能抑制HSC向成纤维细胞转化。5.诱导内源性HO-1增多,可能通过保护肝细胞、抑制炎性细胞浸润、抑制HSC转化、进而抑制肝纤维化。为药物干预肝纤维化进程提供了新的途径。