博尔纳病病毒感染对新生大鼠海马中神经系统相关MicroRNAs的影响

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背景及目的:  博尔纳病病毒(Borna Disease Virus,BDV)是一种非分节段单股负链RNA病毒,具有高度嗜神经性,不仅可能使神经系统来源细胞株形成持续性的非细胞溶解性感染,而且可以使人类感染暴发流行脑炎,也很容易使动物的中枢神经系统尤其是边缘系统(如海马)受到感染,产生如焦虑、过度兴奋、攻击、异常游戏行为及认知缺陷等类似于人类精神分裂症、孤独症等情感障碍疾病的宿主行为障碍。  微小RNA(MicroRNAs, miRNAs)是一类新发现的非编码小RNA分子,它们能够通过与靶基因mRNA上的特定序列结合抑制靶基因的翻译或剪切,进而参与到各种生物学过程,包括发育、细胞分化、肿瘤生长等。许多miRNA与病毒复制、增殖以及细胞的应答等有关。  miRNA芯片技术通过对miRNA表达谱进行高通量的全面分析,提供一系列数据信息,有助于从中提炼出新的假说,揭示疾病的分子机制。  研究 miRNA在宿主抗病毒感染过程中所起的作用,可能会为miRNA与病毒感染的研究提供新的途径。本课题旨在研究 BDV病毒对新生SD大鼠海马中miRNA表达及生物学功能的影响。  方法:  1、选用出生后24 h内的新生SD大鼠,颅内接种病毒滴度为2×105 FFU/ml的BDV Hu-H1病毒液,构建神经发育障碍模型(BDV组或CON组),并用等量PBS液接种作为正常对照组(CON组)。  2、感染56 d后,分离出20只(10只/组)大鼠的海马。  3、8只(4只/组)海马用Trizol法提取出miRNA后,进行芯片检测和生物信息学分析,初步筛选出显著性异常表达的miRNA。  4、6只(3只/组)海马用Qiagen试剂盒提取出miRNA后,进行RT-qPCR检测,进一步验证初步筛选出的miRNA。  结果:  1、miRNA芯片检测初步筛选出9个显著性异常表达的miRNA。与CON组相比,BDV组7个miRNA(miR-145*, miR-146a*, miR-192*, miR-200b, miR-223*, miR-449a和miR-505)显著性上调,2个miRNA(miR-126和miR-374)显著性下调。  2、RT-qPCR进一步验证后,5个(miR-126, miR-200b, miR-374, miR-449a和 miR-505)显著性下调(P<0.05),其余4个(miR-145*,miR-146a*, miR-192*, miR-223*)没有显著性变化。  结论:  1、本研究首次报道了BDV病毒对新生SD大鼠海马中miRNA表达及生物学功能的影响。  2、本研究推测出miR-126,miR-200b和miR-449a与新生SD大鼠BDV感染后神经系统发育、细胞分化、增殖和凋亡高度相关。
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