RetroNectin对CIK细胞增殖、表型变化和杀伤活性影响的初步研究

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目的:初步研究RetroNectin对CIK细胞增值、表性变化及杀伤活性的影响,并探讨其可能机制。方法:采集人外周血单个核细胞,标本分为两组,对照组加入IFN-γ、IL-2、IL-1α、CD3mAb等细胞因子诱导其增殖,实验组另外加入RetroNectin诱导,倒置显微镜下观察培养过程中细胞形态变化,采用活细胞计数法观察CIK细胞增殖,分别绘制细胞增值曲线;流式细胞术检测CIK细胞培养过程中的表型变化;LDH法检测CIK细胞对肿瘤细胞K562细胞和PC-3细胞的杀伤活性;采用AnnexinV/PI染色,流式细胞术检测细胞凋亡情况;流式细胞技术检测不同培养条件下第4d、7d、11d及14d的CIK细胞周期。结果:PBMC在体外经过多种细胞因子的诱导后,能大量扩增生成CIK细胞,培养14天,扩增倍数可达96.13±5.03倍;CIK细胞中的CD3~+CD8~+、CD3~+CD56~+细胞比例随培养时间的延长较PBMC明显增多(p<0.05);细胞的百分率则逐渐下降;CIK细胞对K562细胞和PC-3细胞均有较强的杀伤活性,两者相比较,差异无统计学意义(p>0.05),并且随着诱导时间的延长,这种杀伤活性增强,在诱导培养的第14d杀伤活性最强。经RetroNectin刺激14天后的RN-CIK细胞扩增倍数可达330.46±7.96倍,培养的第7天起明显高于普通培养方法(p<0.05);自培养的第7天,RN-CIK细胞中的CD25~+细胞比例较普通培养的CIK细胞明显增多(p<0.05)。但两种培养方法对CIK细胞的CD3~+CD8~+、CD3~+CD56~+、CD3~+CD4~+表型及细胞杀伤活性的影响无明显差异(p>0.05)。在培养的第11d,RN-CIK细胞与普通培养的CIK细胞凋亡率无明显差异(p>0.05)。S期细胞的比例随所培养时间的延长逐渐升高,在培养的第7d达到最高,并且RN-CIK细胞中S期的细胞比例明显高于普通培养的CIK细胞组(p<0.05)。结论:(1)体外应用抗人CD3单抗、人重组IL-1α、人重组IFN-γ和人重组IL-2能诱导PBMC生成CIK细胞,CIK细胞对K562细胞和PC-3细胞均有较强的杀伤活性。(2)RetroNectin可以明显增加CIK细胞的扩增倍数,但是对CIK细胞的表型变化及杀伤活性影响不大。(3)RetroNectin能促进细胞增殖的可能机制:促进细胞之间的黏附,增强信号传导;诱导T细胞活化;抵抗活化细胞凋亡;促使细胞由G1期进入S期。
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