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本实验以磺酰磺隆和邻甲氧羰基苯磺酰胺为研究对象,采用琥珀酸酐法,分别合成了目标分析物的半抗原SMH和MSH。采用活性酯法将半抗原与载体蛋白BSA共价偶联,制备了人工抗原,经紫外扫描确定偶联成功后,分别以SMH-BSA和MSH-BSA为免疫原免疫新西兰白兔,分别获得了针对两种半抗原的特异性抗血清。双向琼脂扩散法测定抗血清效价大于32/1后采集血清。以硫酸铵分步盐析法分离抗血清中的抗体,冷冻干燥后-20℃保存。用活性酯法制备了酶标半抗原SMH-HRP和MSH-HRP,酶标记物既保持了免疫化学特性,又保持了酶活性,可用于免疫化学分析。筛选了包被抗体-酶标半抗原(E-H)直接竞争ELISA法中最合适的抗体包被浓度、酶标半抗原稀释倍数以及反应所用磷酸盐缓冲液(PB)的pH值、浓度等。结果表明:在中性略偏碱条件下有利于抗体在酶标板上的吸附,在中性略偏酸性条件下有利于抗原抗体的亲和反应。在一定范围内增大PB的浓度有利于抗体与目标物的亲和。甲醇对抗原抗体的亲和力影响较大,乙腈影响相对较小,但试验中其含量应小于5%。成功建立了磺酰磺隆直接竞争酶联免疫吸附分析法。方阵试验确定了抗体最佳包被浓度和酶标半抗原(SMH-HRP)最佳稀释度。在优化条件下,建立了磺酰磺隆的标准抑制曲线,回归方程为:I=29.292logC+111.07,R~2 = 0.9941,线性范围为0.2～200ng/mL,相对标准偏差RSD=10.53%(n=5),IC50= 8.3ng/mL,IC20=0.8 ng/mL。在相同条件下,测定常用磺酰脲类除草剂对抗原抗体的交叉反应性,结果显示交叉反应率<0.04%。在空白土壤中分别添加磺酰磺隆标样,使土壤中磺酰磺隆含量分别为:1μg/g、0.1μg/g、0.01μg/g。添加土样用水/乙腈=1/1提取,E-H直接竞争ELISA法测定,重复4次。土壤中磺酰磺隆标准添加浓度为1μg/g水平时,ELISA测定的回收率82.3%～92.3%,RSD为3.47%;标准添加浓度为0.1μg/g水平时,ELISA测定的回收率99.8%～121.5%,RSD为9.80%;标准添加浓度为0.01μg/g水平时,ELISA测定的回收率102.3%～121.5%,RSD为7.78%。说明磺酰磺隆E-H直接竞争ELISA法能满足其残留分析的要求。这为磺酰磺隆的残留分析提供了一个新的分析技术。成功建立了具邻甲氧羰基苯磺酰脲共同结构化合物的直接竞争酶联免疫吸附分析法。方阵试验确定了抗体最佳包被浓度和酶标半抗原(MSH-HRP)最佳稀释度。在优化条件下,测定了常用磺酰脲类除草剂甲磺隆、胺苯磺隆和苯磺隆对抗体与酶标半抗原的抑制作用,IC50分别为:0.08μg/mL、0.12μg/mL、0.14μg/mL。表明此抗体可以用于目标分析物的检测或样品的筛选。