【摘 要】
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背景:日光性皮炎是一种过量紫外线照射后引起的炎性皮肤病。紫外线照射会诱导蛋白激酶p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38）和JNK（c-Jun N-terminal kinase,JNK）的磷酸化激活,促进日光性皮炎的发生。Janus蛋白激酶2（Janus kinase 2,JAK2）是非受体酪氨酸蛋白激酶,参与多种炎症性免疫疾病,
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背景:日光性皮炎是一种过量紫外线照射后引起的炎性皮肤病。紫外线照射会诱导蛋白激酶p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38）和JNK（c-Jun N-terminal kinase,JNK）的磷酸化激活,促进日光性皮炎的发生。Janus蛋白激酶2（Janus kinase 2,JAK2）是非受体酪氨酸蛋白激酶,参与多种炎症性免疫疾病,也成为炎症相关皮肤疾病的药物靶点。但JAK2在日光性皮炎中的作用、机制以及作为治疗靶点的前景尚不清楚。目的:1.明确JAK2在日光性皮炎发生中的作用。2.明确JAK2与p38或JNK的关系,以及三者在日光性皮炎发生过程中的作用及机制。方法:1.收集日光性皮炎临床样本及日光性皮炎小鼠样本,采用苏木精-伊红染色法（hematoxylin＆eosin staining,H＆E）和免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）检测皮肤组织病理改变及p-JAK2、p-STAT3水平。2.采用紫外线（ultraviolet,UV）辐射模拟装置建立日光性皮炎细胞模型,Western Blot检测JB6 Cl41和HaCat细胞内的p-JAK2、p-p38和p-JNK水平。3.建立活化JAK2的体外激酶反应体系,采用同位素放射自显影和Western Blot检测JAK2对纯化蛋白p38和JNK2的磷酸化修饰。Net Phos 3.1软件预测并筛选p38和JNK2潜在的酪氨酸磷酸化位点,合成相应肽段,采用活化JAK2进行体外肽段激酶实验,确定可能的磷酸化位点。4.采用免疫共沉淀技术检测UV刺激的HaCat细胞内JAK2与p38或JNK的相互作用。5.采用不同浓度JAK2抑制剂XL019预处理,Western Blot检测UV刺激的HaCat细胞内p38磷酸化水平。6.建立沉默JAK2的稳定细胞系,Western Blot检测UV刺激的HaCat细胞内p38磷酸化水平。结果:1.日光性皮炎的临床样本与正常皮肤样本相比,及UV刺激小鼠皮肤样本与对照样本相比,p-JAK2（Y1007/Y1008）和p-STAT3（Y705）水平升高。2.与对照组相比,UV刺激的HaCat和JB6 Cl41细胞内,p-JAK2（Y1007/Y1008）、p-STAT3（Y705）、p-p38（T180/Y182）和p-JNK（T183/Y185）水平以时间和剂量依赖方式升高,且p-JAK2水平升高早于其他分子。3.体外激酶实验显示:与活化JAK2共孵育后,p38、JNK2样品中检测到较强的放射自显影信号;发现p-p38（T180/Y182）、p-JNK（T183/Y185）水平增强。肽段激酶实验发现:与活化JAK2共孵育后,含Y24和Y182位点的p38肽段以及含Y26、Y190和Y320位点的JNK2肽段放射自显影信号较强。4.免疫共沉淀结果显示:UV刺激的细胞裂解液中,加入JAK2抗体与琼脂糖磁珠共孵育,Western Blot检测到p38处有信号,JNK无信号。5.JAK2抑制剂XL019预处理HaCat细胞,经UV刺激后,p-p38（T180/Y182）水平降低。6.与对照组相比,沉默JAK2的HaCat细胞经UV刺激后,p-p38（T180/Y182）水平升高。结论:1.JAK2可能磷酸化p38的Y24和Y182位点,而参与日光性皮炎的发生。2.沉默JAK2后p38活化水平升高,其可能的机制及在炎症相关疾病中的作用,值得进一步研究。
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