【摘 要】
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目的:IL-1家族的新成员白细胞介素-33(IL-33)通过与其受体ST2(又称为IL-1受体样1,IL1RL1)结合发挥生物学功能。当IL-33与ST2形成复合物后,募集IL-1受体辅助蛋白(IL-1Rac P),
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目的:IL-1家族的新成员白细胞介素-33(IL-33)通过与其受体ST2(又称为IL-1受体样1,IL1RL1)结合发挥生物学功能。当IL-33与ST2形成复合物后,募集IL-1受体辅助蛋白(IL-1Rac P),与其结合形成三聚体,并通过丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)和NF-κB进行信号转导。IL-33/ST2轴与多种疾病有关,在机体免疫反应中发挥着重要的作用。有研究显示在慢性乙型肝炎患者血清中s ST2表达较健康对照组高,但机制不明。由于乙型肝炎病毒(HBV)中的X基因表达产物X蛋白(HBx)在肝脏炎症的进展中发挥着多方面的作用,本研究探讨HBx与IL-33/ST2轴的关系以及对肝细胞ST2表达的影响及相关调控机制。方法:收集慢性乙型肝炎(CHB)、HBV相关肝癌患者(HBV-HCC)以及健康人的血清,通过ELISA方法检测不同组血清标本中可溶性ST2(s ST2)的含量;收集HL7702-WT、HL7702-NC、HL7702-HBx细胞不同培养时间的上清液,检测s ST2蛋白的表达情况,以探究HBx对ST2蛋白的影响;构建转录因子GATA-2荧光报告载体和ST2启动子荧光报告分析以明确HBx是否通过GATA-2影响ST2启动子的转录活性;染色质免疫共沉淀(Ch IP)实验验证HBx与GATA-2存在相互作用;同时采用GATA-2过表达和si RNA干扰实验探讨GATA-2对ST2启动子转录的影响。结果:(1)CHB组、HBV-HCC组的血清s ST2水平明显高于健康对照组(Healthy control,Hc)组(P<0.05);HBV-HCC组的血清s ST2水平明显高于CHB组(P<0.05);(2)通过ROC曲线分析,确定CHB和HBV-HCC的最佳截断点分别为23.255 ng/ml和33.740 ng/ml,利用s ST2的最佳截断点对HBV感染相关疾病进展(即CHB和HBV-HCC)的判断有参考价值;(3)培养细胞的验证实验发现HL7702-HBx细胞株s ST2蛋白表达明显高于HL7702-WT、HL7702-NC细胞(P<0.05),HL7702-WT与HL7702-NC细胞s ST2蛋白表达无差异;三株细胞s ST2蛋白表达随时间逐渐增高(P<0.05);(4)HBx通过GATA-2影响ST2启动子转录活性;上调和干扰GATA-2的表达均可影响ST2蛋白及m RNA的表达(P<0.05)。结论:(1)HBV感染可促进肝细胞s ST2的表达,并随着病程发展而呈明显上升趋势;(2)spearman秩相关系数相关性分析及ROC曲线分析显示外周血s ST2检测对于HBV感染相关疾病进展的判断有参考价值;(3)GATA-2在HBx上调ST2启动子转录活性并促进ST2表达中发挥重要作用。
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