【摘 要】
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目的:检测口腔扁平苔藓（OLP）患者颊黏膜表面菌群变化,研究具核梭杆菌对角质形成细胞TLR4/NF-κB通路的影响。方法:（1）收集健康对照与OLP患者颊黏膜样本,高通量技术检测细菌16S rRNA基因,筛选出对照组与OLP组之间颊黏膜表面差异最明显的菌属。（2）real-time PCR技术验证16S测序结果。其次,收集OLP患者损害与非损害黏膜样本,检测16S测序筛选出的细菌表达水平。最后,收
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（81570975）； 上海交通大学医学院2017-2018年度博士创新基金（CBXJ201808）； 上海市科委西医引导类项目（16411961000）；
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目的:检测口腔扁平苔藓（OLP）患者颊黏膜表面菌群变化,研究具核梭杆菌对角质形成细胞TLR4/NF-κB通路的影响。方法:（1）收集健康对照与OLP患者颊黏膜样本,高通量技术检测细菌16S rRNA基因,筛选出对照组与OLP组之间颊黏膜表面差异最明显的菌属。（2）real-time PCR技术验证16S测序结果。其次,收集OLP患者损害与非损害黏膜样本,检测16S测序筛选出的细菌表达水平。最后,收集OLP患者与对照颊黏膜组织,检测组织内细菌表达。原位杂交技术检测OLP患者颊黏膜内细菌存在。（3）体外培养人正常口腔角质形成细胞,并使用具核梭杆菌（ATCC25586）感染细胞。在感染后不同时间点检测细胞增殖、IL-1β、IL-6与TNF-α表达,以及细胞TLR4/NF-κB表达。结果:（1）16S测序发现:（1）属水平,与对照组比较,梭杆菌、颗粒链球、消化链球菌与小单胞菌属在OLP组丰度增加。（2）线性判别分析发现:对组间差异影响最大的菌属是梭杆菌与颗粒链菌。（2）real-time PCR发现,与非损害区域比较,具核梭杆菌在OLP黏膜损害表面表达升高（P=0.001﹤0.01）。在白纹型OLP组,与非损害区域比较,具核梭杆菌在损害黏膜表面表达水平升高（P=0.0174﹤0.05）。OLP患者颊黏膜内尚未发现细菌存在。（3）具核梭杆菌感染细胞2h时,IL-1β基因表达水平最高。具核梭杆菌感染细胞4h时,细胞增殖水平、TLR4与磷酸化p65蛋白表达水平达到高峰。具核梭杆菌感染细胞6h时,IL-6与TNF-α基因表达水平达到高峰。结论:OLP患者黏膜表面菌群结构发生变化,具核梭杆菌可能与OLP损害有关。具核梭杆菌可促进角质形成细胞增殖、IL-1β、IL-6与TNF-α表达以及细胞TLR4/NF-κB通路的活化。提示:具核梭杆菌有可能参与活化OLP损害上皮细胞TLR4/NF-κB,促进上皮细胞炎症反应,最终参与OLP损害的发生。
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