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当前对养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业危害最大的传染病主要有犬瘟热、犬细小病毒性肠炎及犬2型腺病毒喉气管炎和肝炎,本研究期望通过多联基因疫苗的研究达到对以上三种传染病产生有效预防保护的目的,同时可解决现有弱毒疫苗存在的可能返祖及母源抗体干扰问题。本研究针对犬瘟热病毒(CDV)H基因、犬细小病毒(CPV)VP1基因和犬2型腺病毒(CAV-2)F基因的核苷酸序列,设计并合成了三对引物,分别提取相应的DNA、RNA。CPV、CAV直接进行PCR扩增, CDV提取总RNA后,进行RT-PCR。得到的三种目的基因分别与真核表达载体pIRES进行连接,转化、测序;获得的三种免疫质粒经纯化后分别按200、400、800ug三种浓度混合,以市售9周龄且CDV、CPV、CAV中和抗体效价≤2的昆明犬作为实验用犬,混合质粒和200、400、800ug三种浓度的单种质粒磷酸盐溶液分别对实验犬进行免疫实验,以接种空质粒的犬作为对照;每隔8周接种一次,每次接种前采血,测定血清的抗体效价,在第三次接种4周后,对全部实验犬进行用CDV、CPV、CAV-1强毒株进行攻毒,攻毒后观察犬的发病情况,并在攻毒后第7天及14天时采血,测定血清的抗体效价。所有接种不同量pIRCDV-H、pIRESVP1、pIRES-F单种基因疫苗及混合基因疫苗的犬,两次免疫后与对照相比均可提高4-40倍不等的抗体水平,且混合基因疫苗相互之间不发生免疫干扰。攻毒后27只混合基因疫苗免疫的犬除有1只发病,但症状较轻,其余都能抵抗三种强毒的攻击;而接种空质粒的9只对照犬全部发病严重,证明所构建的核酸疫苗在一定程度上可抵抗这三种强毒的攻击。