【摘 要】
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目的：通过采用Kamada的"改良二袖套法"成功建立Wistar→SD大鼠组合原位肝移植模型,联合转染目的基因CTLA4-Ig和IDO,检测排斥反应相关病理及生理指标,观察该联合基因对大鼠原位
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目的：通过采用Kamada的"改良二袖套法"成功建立Wistar→SD大鼠组合原位肝移植模型,联合转染目的基因CTLA4-Ig和IDO,检测排斥反应相关病理及生理指标,观察该联合基因对大鼠原位肝移植模型急性排斥反应中T淋巴细胞凋亡影响并探讨其相关机制. 方法：采用Kamada的"改良二袖套法"建立SD→SD(预实验组N=40)和Wistar→SD(实验组N=52)大鼠组合原位肝移植模型.将实验鼠随机均分成四组,每组13例,其中三组在冷缺血期经门静脉分别注入1ml携带不同目的基因的质粒(1×1011/ml),空白对照组只注入1ml空白质粒(1×1011/ml),即:联合组(pWBP-CTLA4-Ig-IDO)、CTLA4-Ig组(pWBP-CTLA4-Ig)、IDO组(pWBP–IDO)和空白对照组.术后两周内观察各组大鼠一般生存状况(如精神状态、饮食、活动量、黄疸及大小便颜色等);术后第7天每组随机抽取3只大鼠,采集腔静脉或门静脉血,检测肝功能情况;收集肝脏左外叶组织制片,观察比较各组肝脏组织病理改变情况;采用TUNEL法检测大鼠肝脏组织中T淋巴细胞凋亡情况;采用Annexin V-FITC/PI法检测外周血T淋巴细胞凋亡情况;其余大鼠进行生存分析. 结果：预实验组预实验组中共完成40对SD→SD大鼠组合原位肝移植模型,共死亡受体大鼠27例,其中有2例死于术中麻醉意外,9例死于术中、术后出血,2例死于术后感染,2例死于胆道梗阻,4例死于血栓栓塞,3例死于静脉及胆管套管滑脱,剩余5例死于其他原因. 实验组实验组成功完成52对Wistar→SD大鼠组合原位肝移植,结果如下:一般情况方面:空白对照组出现急性排斥应反表现较其余三组明显为早,且在整个观察期内全部死亡,生存率与其余组比较具有明显统计学差异(P<0.05),而联合组与其他两组之间生存率亦有统计学意义(P<0.05);肝功能检测方面,联合组中TBIL、ALT、AST含量较其余三组明显降低,具有明显统计学意义(P<0.05),CTLA4-Ig组和IDO组中的TBIL、ALT、AST含量分别较空白对照组亦有所降低,差异具有统计学意义(P<0.05),但该两组间比较无明显统计学差异(P>0.05);肝脏组织病理学改变情况:空白对照组病理学改变最明显,RAI评分最高,联合组病理改变最轻微,RAI评分最低,其余两组情况介于二者之间.TUNEL法测得空白对照组中肝脏组织内T淋巴细胞凋亡率最低,联合组T淋巴细胞凋亡率最高,其余两组T淋巴细胞凋亡率介于二者之间.Annexin V-FITC/PI法测得空白对照组中外周血T淋巴细胞凋亡最少,联合组T淋巴细胞凋亡最多,其余两组T淋巴细胞凋亡情况介于二者之间.因此,实验结果显示,肝脏组织内T淋巴细胞凋亡率与外周血T淋巴细胞凋亡情况结果相符. 结论:采用Kamada"改良二袖套法"能成功建立大鼠原位肝移植模型,操作相对简单易行,值得推广;联合转染目的基因CTLA4-Ig和IDO能一定程度上促进大鼠原位肝移植模型急性排斥反应中T淋巴细胞的凋亡;大鼠生存率的提高、肝功能的改善、肝脏病理学改变的减轻,可能与T淋巴细胞的凋亡有关.
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