【摘 要】
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F-2毒素又称玉米赤霉烯酮（Zearalenone）,因其具有类雌激素作用会引发畜禽的雌性激素亢进症,进而干扰繁殖相关性能。而单宁酸（Tannic acid）是广泛存在于自然界中的多酚物质,特殊的药理活性和结构上的多重性使其具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤等特性。目的:本实验以昆明小鼠为研究对象,探讨单宁酸对F-2毒素致小鼠卵巢损伤的保护作用及可能的作用机制,从而为将单宁酸在开发为F-2毒素解毒剂提供实验
【基金项目】
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国家重点研发计划资助项目（项目编号:2016YFD0501200）；
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F-2毒素又称玉米赤霉烯酮（Zearalenone）,因其具有类雌激素作用会引发畜禽的雌性激素亢进症,进而干扰繁殖相关性能。而单宁酸（Tannic acid）是广泛存在于自然界中的多酚物质,特殊的药理活性和结构上的多重性使其具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤等特性。目的:本实验以昆明小鼠为研究对象,探讨单宁酸对F-2毒素致小鼠卵巢损伤的保护作用及可能的作用机制,从而为将单宁酸在开发为F-2毒素解毒剂提供实验基础。方法:将90只健康的7w昆明雌鼠随机均分成6组,每组15只,即对照组、F-2毒素组、F-2毒素+低、中、高单宁酸组（50、100、200mg/kg·bw）和F-2毒素+100mg/kg·bw维生素E组。对照组灌服10%的乙醇溶液,其他各组灌服F-2毒素悬浊液（10mg/kg,溶于10%的乙醇）,1次/d,连续7d,诱导生殖系统损伤模型;随后对照组和F-2毒素组灌服双蒸水,剩余各组灌服相应剂量的的单宁酸和维生素E,1次/d,连续7d。随后处死小鼠,收集血液和生殖器官进行以下实验:检测小鼠血清中生殖激素雌二醇（Estradiol,E2）,促卵泡素（Follicle Stimulating Hormone,FSH）,促黄体生成激素（Luteinizing Hormone,LH）水平;检测小鼠卵巢活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽（Glutathione,GSH）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）水平;H&E染色观察卵巢的组织形态学变化,Tunel法检测卵巢细胞凋亡;免疫组化法检测小鼠卵巢caspase-3、caspase-8、caspase-9、雌激素受体（Estrogen Receptor,ER）的表达情况;Western blot检测小鼠卵巢死亡受体信号通路Fas、Fas L、caspase-8,线粒体凋亡信号通路Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9蛋白表达情况。结果:1)单宁酸治疗组能够有效缓解F-2毒素所致卵巢外观充血红肿情况,显著降低卵巢的脏器系数（P<0.05）;2)单宁酸治疗后,F-2毒素引发的小鼠发情周期紊乱得以恢复正常;3)100mg/kg和200mg/kg单宁酸能够显著降低由F-2毒素所致生殖激素E2水平的升高（P<0.05）;与对照组比较,F-2毒素虽然能够减少体内的LH和FSH的水平,但差异并不显著;而添加单宁酸后与F-2毒素组比较,只有200mg/kg单宁酸能够显著降低了LH和FSH的水平（P<0.05）;而各组之间LH/FSH均无显著差异;4)对卵巢进行H&E染色发现,与F-2毒素组比较,单宁酸显著增加了健康生长卵泡数量;5)各实验组SOD活性无显著差异;与对照组比较,F-2毒素组的CAT活性显著增高（P<0.05）,添加单宁酸后与F-2毒素组比较CAT活性进一步升高,其中100mg/kg和200mg/kg单宁酸组差异极显著（P<0.01）;与对照组比较,F-2毒素组的GSH含量显著减少（P<0.05）,添加单宁酸后与F-2毒素组比较,50mg/kg单宁酸组GSH含量下降极为显著（P<0.01）,而100mg/kg和200mg/kg单宁酸组GSH含量却有一定程度的升高,差异不显著;通过添加单宁酸能够极显著降低由F-2毒素所引发的卵巢ROS和MDA水平升高（P<0.01）;6)添加单宁酸可以极显著抑制由F-2毒素诱导的卵巢颗粒细胞凋亡;7)免疫组化的结果显示,200mg/kg单宁酸能够及显著降低由F-2毒素造成的卵巢中caspase-3、caspase-8、caspase-9和ER的表达升高;8)Western blot检测发现,单宁酸治疗组能降低由F-2毒素造成的Fas、Fas L、caspase-8、caspase-3和caspase-9表达以及Bax/Bcl-2升高（P<0.01）。结论:单宁酸对F-2引发的卵巢损伤具有修复作用,可通过提高生殖器官抗氧化能力,清除卵巢内ROS水平,降低卵巢细胞的凋亡率,恢复相关生殖激素水平和发情周期,从而达到修复作用;而这种修复作用可能与单宁酸抑制ER和ROS介导的死亡受体和线粒体凋亡信号通路有密切关系。
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