论文部分内容阅读
蜱是一类专性吸血的体外寄生动物,宿主范围广泛,繁殖力极强,在吸食血液过程中可传播多种病原体,进而引起疾病。卵黄蛋白(vitellin,Vn)降解是胚胎发育过程中重要的生理事件,Vn在水解酶的参与下产生氨基酸、糖类和脂质等,为胚胎发育提供营养和能量。这一过程受水解酶有序调控,以保证胚胎发育程序性完成。温度作为一个重要的生态因子,影响蜱的繁殖与发育,有关蜱Vn降解及水解酶对温度的响应尚无研究。长角血蜱在我国分布广泛且可传播多种病原体,对人类健康及畜牧业发展构成很大的威胁,因此研究温度对长角血蜱胚胎发育过程中Vn降解及组织蛋白酶B(Cathepsin B,CB)、组织蛋白酶D(Cathepsin D,CD)和酸性磷酸酶(Acid phosphatase,AP)的影响具有重要的科学意义。1.利用统计学方法研究了孵化指数对温度的响应。结果显示:孵化期表现为低温组(16℃:40天;20℃:32.5天)较对照组(26℃:22.5天)延长,高温组(30℃:20天;35℃:19.5天)较对照组缩短;低温组(16℃:21.1%;20℃:63.2%)与高温组(30℃:60.7%;35℃:60.7%)孵化率较对照组(26℃:88.1%)均降低。2.运用免疫学及统计学等方法,分析了胚胎发育阶段Vn降解对温度的响应。结果显示:低温组与高温组的第1天Vn含量较对照组均降低。Vn因温度不同发生不同程度、不完全降解,且伴随Vn的降解不断产生新的肽段。低温使新肽段a、b、c和d出现时间延迟;高温则使新肽段出现时间提前。3.运用荧光定量PCR技术,分析了胚胎发育阶段三种水解酶表达量对温度的响应。结果显示:低温促进CB表达,抑制CD与AP表达;高温对CB和AP表达量的影响无明显规律,但促进了CD的表达。低温使三种酶表达量的峰值均延迟;高温对CB表达量峰值的影响无明显规律,但使CD与AP提前。可见温度对三种酶表达量产生的影响不同,说明这三种酶在不同胚胎发育阶段具有多种不同的功能,且均存在阶段特异性。CD和AP表达量峰值的出现时间在低温组推迟、高温组提前与孵化期对温度的响应存在正相关关系。4.利用底物特异性,检测了三种水解酶活性对温度的响应。结果显示:三种酶活性变化模式对温度的响应各不相同。其中低温对CB活性峰值的影响无明显规律;高温却使其推迟。低温和高温均导致CD活性峰值时间提前。低温组16℃与高温组35℃下的AP活性整体显著降低,并且低温使AP提前出现较高值;高温也使出现峰值的时间较对照组提前。