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目的：探讨慢病毒载体介导的胰岛素样生长因子-1（IGF-1）基因修饰的肌源性干细胞（MDSCs）移植对雌性压力性尿失禁大鼠模型的作用及可能机制，为细胞移植策略治疗女性压力性尿失禁提供新的理论依据。方法:1、体外原代MDSCs的分离、纯化、分化和鉴定。取Wistar大鼠腓肠肌，机械法和酶消化法后，采用改良差速贴壁法纯化大鼠原代MDSCs，通过倒置相差显微镜观察细胞的生长形态和分化情况，采用流式细胞仪术、细胞免疫荧光化学、免疫细胞化学对P3-MDSCs进行表型鉴定，同时对分化培养的P3-MDSCs进行MyHC蛋白检测。2、采用体外重组（in-fusion）技术，以携带增强型绿色荧光蛋白（eGFP）的pGC-FU慢病毒载体系统作为基因转导的媒介，构建携带IGF-1基因重组的慢病毒表达载体（pGC-FU-IGF-1），通过聚合酶链式反应（PCR）、酶切和测序的方式鉴定所构建的载体并转染293T细胞，以荧光显微镜观察绿色荧光，以Western blot检测GFP蛋白的表达，以实时定量荧光PCR（RT-QPCR）检测慢病毒的滴度。将携带有IGF-1＆eGFP融合基因的慢病毒和仅携带eGFP的慢病毒感染大鼠MDSC（s分别为IGF-1/MDSCs组和GFP/MDSCs组），通过荧光表达情况以及酶联免疫吸附试验（ELISA）结果确定最佳感染复数（MOI）。3、取最佳MOI慢病毒感染MDSCs，待IGF-1/MDSCs组和GFP/MDSCs组达到90%融合后，模拟体内氧化应激微环境，体外建立过氧化氢（H2O2）诱导细胞凋亡模型，MTS法检测不同浓度不同时间的H2O2干预对MDSCs活性的影响，并通过流式、DNA ladder探讨H2O2对MDSCs凋亡的影响；Western blot检测MDSCs内抗凋亡相关蛋白P-AKT、NFκB、Bcl-2以及Bcl-xl与凋亡相关蛋白caspase-3、PARP的表达情况，探讨IGF-1基因修饰的MDSCs抑制细胞凋亡的可能机制。4、采用双侧阴部神经横断法（PNT）建立雌性压力性尿失禁大鼠模型，60只成年雌性大鼠随机均分为假手术组（S组）、溶剂对照组（PBS组）、空病毒感染的MDSCs移植组（GFP/MDSCs组）和IGF-1基因修饰的MDSCs移植组（IGF-1/MDSCs组），以1×106个/只细胞数注入尿道距膀胱约0.5cm处，每组再按治疗后1、2、4周分为3个亚组（每组5只）。采用尿动力学评价造模成功与否，并评价注射治疗1、2、4周后尿道闭合功能情况。注射治疗1周后，采用激光共聚焦扫描显微镜评价移植细胞存活情况。注射治疗4周后，免疫组织化学评价近端尿道毛细血管生成情况；伊红-苏木素（HE）及Masson染色评价近端尿道组织病理学改变；多重免疫荧光技术评价移植细胞的分化情况。在注射治疗的各个时间点，免疫组织化学和Western blot检测胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达情况。结果：1、所分离培养的MDSCs具有低粘附性、小圆形、折光性强的生物学特性，可以形成肌管，细胞表型鉴定为Sca-l（＋）、CD34（＋）、CD45（－）和desmin（＋），符合MDSCs的特征。2、所构建的IGF-1＆eGFP重组慢病毒载体，经PCR、酶切和测序鉴定完全正确，转染293T细胞后能够正常表达，测得病毒滴度为2×108TU/ml。慢病毒感染MDSCs后，随着MOI值的增加，荧光强度逐渐增强，并伴随IGF-1分泌水平显著增加（p﹤0.01）。3、低溶度（﹤200uM）、短时间的H2O（2﹤0.5h）干预对MDSCs的活性无明显影响（p＞0.05），随着H2O2浓度的增加，作用时间的延长，MDSCs的活性显著下降（p﹤0.01），其中，GFP/MDSCs组下降更为明显（p﹤0.01）。通过DNA ladder凝胶电泳以及流式细胞仪双染检测分析，发现H2O2能够诱导MDSCs caspase酶依赖性凋亡，而IGF-1能够拮抗H2O2作用，上调抗凋亡相关蛋白P-AKT、NFκB、Bcl-2以及Bcl-xl的表达（p﹤0.05），降低caspase-3、PARP的水解程度（p﹤0.01）。4、成功构建压力性尿失禁大鼠模型。细胞注射治疗1周后，IGF-1/MDSCs组的细胞存活率显著高于GFP/MDSCs组（p﹤0.01），4周后，移植的细胞可以分化为MyHC，其中IGF-1/MDSCs组的细胞分化强度强于GFP/MDSCs组。IGF-1/MDSCs组和GFP/MDSCs组在细胞治疗1、2、4周后无论是膀胱最大容量（MBC）还是腹压漏尿点压力（ALPP）均显著高于PBS组（p﹤0.01），低于假手术组（p＞0.05），其中IGF-1/MDSC组略高于GFP/MDSCs组（p＞0.05）。治疗4周后，IGF-1/MDSCs组新生的毛细血管密度显著高于GFP/MDSCs组（p﹤0.01），后者又高于PBS组及S组（p﹤0.01）。细胞治疗的各个时间点，IGF-1/MDSCs组的IGF-1和VEGF蛋白表达量与各组比较显著升高（p﹤0.01），而GFP/MDSCs组在细胞治疗1、2周后，明显高于S组及PBS组（p﹤0.01），4周后，降至正常水平（p＞0.05）。组织形态学观察发现：IGF-1/MDSCs组有较多新生血管及肌纤维形成，GFP/MDSCs组可见部分新生肌纤维和少许新生血管，PBS组可见尿道平滑肌、横纹肌层变性、萎缩，血管减少。定量肌/胶原比率发现：S组﹥IGF-1/MDSCs组﹥GFP/MDSCs组﹥PBS组（p﹤0.05）。结论：本研究可以从Wistar大鼠中成功分离出纯度较高的MDSCs；成功构建IGF-1＆eGFP融合基因重组慢病毒表达载体，并能够安全有效地感染大鼠MDSCs，持续稳定表达；IGF-1基因修饰的MDSCs增强了其在移植微环境中的生存能力，可能与IGF-1/PI3K/AKT/NFκB/Bcl-2家族蛋白信号通路密切相关，并通过其旁分泌功能，共同改善尿道括约肌闭合功能。