不同血清型的致病性大肠杆菌是引起幼畜腹泻的主要病因之一,给畜牧业经济的发展带来严重影响。目前,本病的防治主要以药物治疗和疫苗注射免疫为主。疫苗注射具有良好的预防效果,但也会引起动物应激,且费时费力。而口服疫苗具有简便安全的特点和优势,可以刺激动物机体产生黏膜免疫反应和系统体液免疫反应,因此具有很大应用价值和发展前景。本研究拟采用微囊包被技术制备羊源致病性大肠杆菌灭活口服疫苗,以期为研制防治羔羊大肠杆菌性腹泻口服疫苗新剂型奠定基础。本研究主要包括以下实验内容:1、微囊化羊大肠杆菌口服灭活疫苗制备工艺的优化采用佐剂筛选获得羊源致病性大肠杆菌蜂胶佐剂灭活疫苗作为芯材,高分子海藻酸钠天然材料作为壁材。对三种常用包被方式:喷雾干燥法、乳化冻干法和锐孔-凝聚浴法进行包被方法筛选,测定所得产品包被率,以此优化该口服疫苗包被工艺。2、不同佐剂微囊化大肠杆菌口服灭活疫苗对小鼠免疫效果的研究选取健康雄性小鼠作为实验对象,设立弗氏佐剂注射组、铝胶佐剂注射组、蜂胶佐剂注射组及对照组,经微量凝集试验和建立的间接ELISA试验检测免疫血清抗体效价,评价不同佐剂疫苗免疫效果。选取最佳佐剂微囊化口服疫苗对小鼠进行口服免疫效果评价实验,并进行攻毒实验,评价不同剂量下该口服疫苗的免疫保护效果。3、微囊化大肠杆菌蜂胶佐剂口服灭活疫苗对羔羊免疫效果研究采用7日龄湖羊60只作为实验动物,将其分为空白对照组(口服生理盐水)、注射组(1 mL/只)和口服组:低剂量组(0.5 g口服疫苗干粉/只)和高剂量组(1 g口服疫苗干粉/只)进行免疫保护试验,采用微量凝集法、间接ELISA法、淋巴细胞转化法及羔羊粘膜分泌型免疫球蛋白A的检测,对羔羊的体液免疫、细胞免疫及粘膜免疫不同指标进行测定,并且对羔羊进行攻毒实验来验证该口服疫苗的免疫保护效果。结果显示:通过喷雾干燥法制得的微囊化产品包被率最高,达75.23%,粒径平均小于10μm,经优化后所制得微胶囊的含菌量为7.52×1011个菌/g干粉,并具有良好的释放性和耐酸性。三种佐剂筛选表明蜂胶佐剂攻毒实验中的免疫保护效果最佳,小鼠死亡只数为0只,对小鼠的免疫保护率达到100%。使用蜂胶佐剂制备的微囊化大肠杆菌口服灭活疫苗对小鼠进行免疫,经微量凝集试验和间接ELISA试验检测,自免疫第7天后口服组和注射组就可产生抗体,注射组在免疫第7天至35天的抗体效价均显著高于对照组(P<0.05),证明该疫苗液具有良好免疫效果。口服实验组在免疫第7天至35天的抗体效价均显著高于对照组(P<0.05),证明口服实验组能够产生免疫保护。口服实验组在免疫第28天时免疫效价显著低于注射组(P<0.05),其它免疫天数下无差异性(P>0.05),证明口服实验组除免疫第28天以外,均能产生与注射组相同的免疫效果。免疫后口服实验组中的20倍基础剂量OD 492/630高于5倍基础剂量,且21天、28天、35天的抗体效价差异显著(P<0.05)。在不影响血清抗体效价情况下可以考虑将5倍基础剂量组作为推荐剂量。在7日龄湖羊的微囊化大肠杆菌口服疫苗免疫效果实验中发现,本实验中高倍剂量组的抗原量在高出注射组抗原量的75.2倍时可以产生优于注射疫苗的细胞免疫。各试验组羔羊在免疫第28天的肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的含量均有升高,含量最高为口服组中的高剂量组,达15.88μg/mL。攻毒实验中,注射组和口服组中的高剂量组羔羊腹泻只数为0只,对羔羊有免疫保护作用。结果表明:微囊化羊源大肠杆菌口服灭活疫苗可以有效刺激羔羊产生特异性免疫保护,其中黏膜免疫和体液免疫均有良好免疫应答。本实验结果表明该微囊化大肠杆菌蜂胶佐剂灭活疫苗在进一步优化免疫剂量和最佳免疫时间等基础上有望用于羔羊腹泻疾病防治生产实践。