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鸭瘟病毒(duck plague virus,DPV)属疱疹病毒科(herpesvirales)α疱疹病毒亚科(Alphaherpesvirinae),可引起禽类急性败血症,对世界各国水禽业具有严重危害性。疱疹病毒micro RNA(mi RNA)的数量占病毒mi RNA总数的90%以上,其多数成员编码的mi RNA研究已有较大进展,但关于鸭瘟病毒mi RNA的研究报道甚少。本研究以对病毒复制具有重要调控作用的立即早期基因ICP4为目的基因,结合实验室测序获得的CHv株编码的39个鸭瘟病毒mi RNA,筛选出靶向病毒ICP4基因的mi RNA,并对其功能进行了初步研究,结果如下:1靶向鸭瘟病毒ICP4基因的mi RNA筛选预测结果显示,mi R-D22-3p、mi R-D22-5p及mi R-D23-5p均完全互补于ICP4基因,本试验选择由同一前体分化的mi R-D22-3p及mi R-D22-5p为筛选对象。将mi R-D22-5p mimics和NC mimics分别与荧光质粒pmir GLO-ICP4-WT及pmir GLO-ICP4-MUT5p共转染COS7细胞。结果表明,与NC mimics相比,mi R-D22-5p mimics可显著抑制pmir GLO-ICP4-WT的相对荧光强度,而对pmir GLO-ICP4-MUT5p的相对荧光强度影响则无显著差异,说明mi R-D22-5p可与预测靶位点特异性结合。将mi R-D22-3p mimics和NC mimics分别与pmir GLO-ICP4-WT及pmir GLO-ICP4-MUT3p共转染COS7细胞。结果表明mi R-D22-3p mimics各组与NC mimics各组的荧光强度差异不大。因此选择mi R-D22-5p进行后续试验研究。2 mi R-D22-5p对鸭瘟病毒ICP4基因表达的影响将荧光质粒ICP4-EGFP及空载EGFP-N1分别转染DEFs,观察发现重组荧光蛋白外形为规整椭圆形,与空载蛋白在形态大小上有较大差异,易于区分。将ICP4-EGFP分别与mi R-D22-5p mimics及NC mimics共转染DEFs,相对荧光定量检测ICP4基因m RNA的表达,发现mi R-D22-5p对ICP4基因m RNA的表达具有明显抑制作用;显微镜下观察发现转染mi R-D22-5p mimics组的荧光蛋白量明显低于NC mimics组,提示mi R-D22-5p对ICP4荧光蛋白的表达具有抑制作用。3 mi R-D22-5p对鸭瘟病毒增殖的影响将50nmol的mi R-D22-5p mimics及NC mimics转染DEFs,12h后感染鸭瘟病毒,在感染后第24h、48h和72h检测病毒DNA拷贝数,发现鸭瘟病毒感染后第24h和第48h,mi R-D22-5p mimics组及NC mimics组的DNA拷贝数无明显差异,而72h时mi R-D22-5p mimics组的DNA拷贝数明显低于NC mimics组,提示mi R-D22-5p mimics对鸭瘟病毒的增殖具有抑制作用。将50nmol,100nmol,300nmol的mi R-D22-5p mimics及NC mimics转染DEFs,12h后感染鸭瘟病毒,感染后第72h时观察细胞病变并检测病毒DNA拷贝数。结果发现随着mi R-D22-5p mimics浓度的增加,空斑数量逐渐减少且空斑逐渐变小,病毒DNA拷贝数也呈现逐渐减少的趋势,推测在一定范围内,mi R-D22-5p mimics对病毒增殖的抑制作用随着mimics浓度的增加逐渐加强。