【摘 要】
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油菜花叶病毒（Oil-Seed Mosaic Virus;ORMV/Youcai mosaic virus;Yo MV）是一种棒状单体基因组病毒,属单链核糖核酸,烟草花叶病毒属的一种,能够侵染油菜等十字花科作物。其结构基因含有至少四个开放阅读框,可以编码四种蛋白质,其中表达的125KDa复制酶蛋白（P125）不仅是油菜花叶病毒引起植物花叶病的一种致病蛋白,同时该蛋白也是一种可以抑制基因沉默的抑制因
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油菜花叶病毒（Oil-Seed Mosaic Virus;ORMV/Youcai mosaic virus;Yo MV）是一种棒状单体基因组病毒,属单链核糖核酸,烟草花叶病毒属的一种,能够侵染油菜等十字花科作物。其结构基因含有至少四个开放阅读框,可以编码四种蛋白质,其中表达的125KDa复制酶蛋白（P125）不仅是油菜花叶病毒引起植物花叶病的一种致病蛋白,同时该蛋白也是一种可以抑制基因沉默的抑制因子,在体外P125蛋白可以结合21nt大小的小RNA。赵贤雷等前期观察到P125蛋白的表达造成拟南芥晚花表型。本研究中采用农杆菌介导转化法,在本生烟中表达P125蛋白,探究该蛋白对本生烟正常生长发育的影响,以便同拟南芥中的实验结果做对比分析,并且有助于后续开展蛋白互作、植病互作等实验;同时,以晚开花株系Line31-1-1为材料,进行了EMS（Ethyl methanesulfonate）诱变,并分别在M1和M2群体筛选恢复开花突变体。另外探索了本生烟小型化种植的可行性,建立完整的本生烟小型化种植方法,以提高本生烟的空间复种指数,为实验室条件下本生烟的规模化种植提供有利条件。主要研究结果如下:1.对前期获得的19个单抗T1代株系进行了Kan抗性筛选,共获得符合3:1分离比的株系15个;T2代分离得到了7个Kan抗性纯合株系。2.利用农杆菌GV3101（p MDC160-P125）二次侵染转化单抗本生烟,得到T0代双抗本生烟167株。对69个T1代株系进行了Basta抗性平板筛选,有56个符合3:1分离。对139个T2代株系进行了Kan平板和Basta平板筛选,得到了其基因型数据,其中有26个株系为双抗纯合株系,另外分离得到18个只含ORMV-P125基因的单抗纯合株系。3.对双抗本生烟进行了初步表型观察,发现一个缺刻叶表型和一个多分枝表型。4.以晚开花拟南芥为材料进行了EMS诱变,在M1群体发现了一个恢复开花候选突变体MEF-1,对其子代进行Kan和Basta抗性鉴定,确定MEF-1突变体为双抗纯合株系,并且其子代开花时间与野生型拟南芥一致。5.探究了本生烟小型化种植的可行性,建立了完整的本生烟小型化种植方法,将本生烟的复种指数提高了8倍。总而言之,本研究利用农杆菌转化法在本生烟中表达ORMV-P125基因,获得了转基因双抗纯合株系并进行了初步的表型观察;另外以晚开花拟南芥为材料进行了EMS诱变,发现了一个恢复开花候选突变体MEF-1并进行了初步鉴定。
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