益气活血法调节微血管病变与肾脏AQP2/4的效应研究

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目的:慢性肾脏病患者中,气虚血瘀证普遍存在。益气活血法在慢性肾脏病治疗中,发挥十分重要的作用。黄芪与丹参分别为补气、活血中药的代表,且黄芪丹参配伍在临床处方中经常使用。本实验目的在于:1.研究黄芪丹参对气虚血瘀大鼠模型的微血管损伤的调节作用;2.研究黄芪丹参对大鼠气虚血瘀模型肾脏AQP2/4的调节作用;3.探讨不同比例配伍的黄芪丹参对微血管损伤的量效作用。  方法:本实验选取4周龄雄性,SPF级饲养,共60只,体重(220±30)g,将60只SD大鼠随机分为两组,正常组10只,模型组50只,模型组采用腹部皮下注射0.1%盐酸肾上腺素0.8ml/kg。注射完2h后将大鼠浸入准备好的0℃冰水中游泳,正常组80g/kg饲料喂养,模型组40g/kg喂养。早晚七点各给予一半饲料。连续14d,观察大鼠精神、毛发、舌质颜色等基本状态。大鼠精神状态差、舌质出现紫暗,观察大鼠耳部血流速度变缓,气虚血瘀证模型造模成功。其中造模成功的有36只,将造模成功的36只大鼠随机分为6组,每组6只,即模型组和丹参组、黄芪组、黄丹Ⅰ、黄丹Ⅱ、黄丹Ⅲ,正常对照组:生理盐水2ml/(kg·d),模型组:生理盐水2ml/(kg·d),丹参组、黄芪组、黄丹Ⅰ、黄丹Ⅱ、黄丹Ⅲ组分别:0.83、0.55、1.60、2.94、1.59g/(kg·d)每日灌胃(按照体表面积换算药量),连续28d。  结果:研究结果表明模型组大鼠出现精神状态差、舌质出现紫暗,采用酶联免疫吸附方法(elisa)检测ANG2、CD31的含量评价微血管损伤的严重程度,用显微镜观察各组大鼠肺脏组织病理变化,Western-blot及免疫组织化学方法检测各组大鼠AQP2、AQP4在肾脏的表达水平。通过Elisa法测定各组大鼠血清ANG2、CD31含量,得知模型组与正常组相比大鼠血清中ANG2、CD31含量均增加,且与模型组相比有意义,用药组均比模型组降低。丹参组与模型组相比ANG2降低有意义,黄芪组与模型组相比CD31降低有意义,复方组与模型组相比均有意义,且黄丹Ⅲ降低最为明显。通过光镜观察肺脏组织形态可以发现:对照组:组织结构正常,肺泡可见肺泡囊结构。模型组:与对照组相比较,肺泡壁毛细血管扩张、淤血,肺泡壁出现广泛增厚,部分肺泡出现扩张,组织可见炎性细胞浸润。丹参组、黄芪组:与对照组相比较,肺间质及肺泡腔水肿,肺泡壁增厚,肺泡壁毛细血管扩张、淤血,少量炎性细胞浸润。黄丹Ⅰ、黄丹Ⅱ组:与对照组比较,肺泡壁出现增厚,部分肺泡壁的毛细血管呈现出扩张、淤血,可见炎性细胞的浸润。黄芪丹参Ⅲ组:肺泡壁毛细血管扩张不明显,淤血的程度最为轻微。通过Western-blot与免疫组织化学方法结果可以发现Western-blot与免疫组织化学法所测AQP2、AQP4在肾脏表达相一致。模型组与正常组相比AQP2、AQP4表达均上升,用药后均有所下降,且均以黄芪丹参配伍后降低最为明显。  结论:1.黄芪丹参对气虚血瘀大鼠模型微血管损伤的具有一定改善作用;2.黄芪丹参及其配伍对大鼠肾脏AQP2、AQP4具有下调作用,推测黄芪丹参配伍可通过调节AQPs发挥保护肾脏的作用,为中医运用“活血利水法”治疗肾脏病提供部分理论支持;3.黄芪丹参以1∶2配伍对于该模型微血管损伤及肾脏AQP下调最明显,为临床运用黄芪丹参治疗肾脏病提供部分理论支持。
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