40岁之前的妇女出现闭经、促性腺激素水平升高、雌激素缺乏等症状,称为卵巢早衰(Premature Ovarian Failure,POF)。现代文献有报道用归肾丸治疗卵巢早衰、月经过少等疾病,探索归肾丸对POF的治疗作用及其机制,可为研究归肾丸治疗卵巢早衰药效提供理论基础和疾病诊断标准。本研究的目的是通过建立小鼠免疫性卵巢早衰模型,以归肾丸水提物进行治疗观察和评价,探索其对免疫性卵巢早衰病症的治疗效果和作用机制。SPF级BALB/c小鼠70只,雌性,检疫合格后,选择动情周期正常的小鼠,以完全随机法分为阴性对照组10只,模型组60只。阴性对照组注射生理盐水;模型组以小鼠透明带3(ZP3)的第330~342个氨基酸序列所合成透明带多肽经足底和腹部皮下多点注射免疫建立免疫性卵巢早衰动物模型。造模成功后按体重随机区组法,分为5组,即模型组、戊酸雌二醇组、归肾丸低、中、高剂量组,每组12只。各组均于造模后开始灌胃给予相应药物治疗4w。给药4周取血清,ELISA法检测血清白介素-17(IL-17);取血后,立即颈椎脱臼法处死小鼠,取小鼠卵巢、脾脏、胸腺、子宫和脑垂体称重。卵巢4%多聚甲醛固定,采用病理HE染色法,计算卵巢的各级卵泡数和黄体数;免疫组化法检测卵巢细胞因子白介素-1β(IL-1β)。结果表明:采用小鼠透明带多肽免疫小鼠后。模型组小鼠性周期紊乱;卵巢次级卵泡、成熟卵泡和黄体明显减少,闭锁卵泡明显增加;小鼠脾脏系数增加,胸腺系数、子宫系数、脑垂体系数及卵巢系数均明显下降。给予归肾丸后,结果显示,与模型组比较,戊酸雌二醇组和归肾丸低、中、高剂量组小鼠次级卵泡数均呈显著性增加(p<0.05、p<0.05、p<0.01、p<0.05);戊酸雌二醇组和归肾丸中、高剂量组小鼠成熟卵泡均呈显著性增加(p均<0.05);戊酸雌二醇组和归肾丸低、中、高剂量组小鼠闭锁卵泡均呈显著性减少(p<0.01、p<0.01、p<0.05、p<0.01);归肾丸高剂量组小鼠黄体呈显著性增加(p<0.05)。与模型组比较,戊酸雌二醇组、归肾丸低、中、高剂量组小鼠卵母细胞内卵泡液白介素-1β有显著性减少(p均<0.01);戊酸雌二醇组和归肾丸低、中、高剂量组小鼠颗粒细胞卵泡液内白介素-1β均无显著性差异(p均>0.05);戊酸雌二醇组和归肾丸低、中、高剂量组小鼠血清白介素-17呈显著性减少(p<0.01、p<0.05、p<0.05、p<0.05)。结果表明,模型组小鼠细胞因子IL-17及IL-1β呈强表达。一定剂量归肾丸能明显增加次级卵泡、成熟卵泡和黄体数量,减少闭锁卵泡数量;降低细胞因子IL-17及IL-1β的表达并呈一定的剂量依赖关系。本文结论:本研究采用多肽抗原建立自身免疫性卵巢早衰小鼠(POF)模型,模型组小鼠次级卵泡和成熟卵泡显著减少,而闭锁卵泡显著增加,表明建模成功。模型组小鼠卵巢的卵母细胞白介素-1β和血清白介素-17呈强表达,而归肾丸组显著降低,提示POF小鼠出现免疫调节紊乱,归肾丸汤剂可通过调节细胞因子白介素-1β和白介素-17改善自身免疫紊乱,从而起到改善卵巢卵泡功能的作用。