星星草PtMAPKK6基因的抗逆功能研究

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星星草是有较强耐盐能力的盐生植物,是研究植物抵御逆境胁迫分子机制和分离抗逆基因的良好材料。在本实验室先前的研究中,已成功分离了星星草PtMAPKK6基因,并发现PtMAPKK6基因广泛参与星星草根部对低温、干旱及盐胁迫等逆境的应答反应过程。本研究在此基础上,将PtMAPKK6基因转化到pbs2(PBS2编码酵母菌促分裂原活化蛋白激酶激酶,MAPKK)缺陷型酵母菌中,获得了功能互补酵母菌。以野生型、pbs2缺失突变体及空载体转化酵母菌为对照,分析了MAPKK功能互补酵母菌与对照组酵母菌在胁迫条件下的生长势,结果表明星星草PtMAPKK6基因在pbs2缺失突变体酵母菌中的导入可以提高其抵御渗透、低温及NaCl胁迫条件的能力,星星草PtMAPKK6基因可能参与了pbs2缺陷型酵母菌在渗透、低温及NaCl等胁迫条件下的信号传导过程。  为进一步研究PtMAPKK6的功能,构建了PtMAPKK6基因的植物超表达载体与拟南芥AtMAPKK6基因的抑制表达载体,利用农杆菌介导的蘸花法将植物超表达载体和抑制表达载体以及空载体转化到野生型拟南芥植株中。经过潮霉素筛选和PCR鉴定,获得了T2代拟南芥转基因植株。采用实时荧光定量PCR技术对T2代转基因植株中目的基因的表达量进行了分析,选取表达量中等的PtMAPKK6超表达和AtMAPKK6抑制表达植株进行了PEG和Na2CO3胁迫,以空载体转化植株和野生型拟南芥植株作为对照,测定胁迫条件下转基因植物叶片中POD、SOD及CAT等酶的活性,结果表明星星草PtMAPKK6基因超表达植株叶片中POD、SOD及CAT等酶的活性显著高于野生型及空载体转化植株,而AtMAPKK6抑制表达植株叶片中酶的活性要明显低于野生型及空载体转化植株。星星草PtMAPKK6基因可能通过调控抗氧化物酶的活性参与拟南芥在逆境条件下的应答反应过程。
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