目的:(1)探讨糖基转移酶β3Gn-T8在胃癌组织与癌旁非肿瘤胃组织表达的差异。(2)在胃癌组织、胃癌AGS细胞、胃癌细胞裸鼠移植瘤水平分别探讨糖基转移酶β3Gn-T8对胃癌增殖侵袭能力的影响。(3)探讨糖基转移酶β3Gn-T8对胃癌侵袭能力的影响机制。方法:(1)通过免疫组织化学方法检测β3Gn-T8在由97例人胃癌组织和89例癌旁非肿瘤胃组织制作而成的组织芯片上的表达并分析其差异。收集97例胃癌组织标本的临床病理参数并通过统计学分析胃癌组织β3Gn-T8的表达与临床病理参数的关系。通过免疫组织化学的方法检测肿瘤转移相关基因MMP-2,TIMP-2以及肿瘤增殖相关基因PCNA在97例胃癌组织中的表达,并分析β3Gn-T8的表达与MMP-2,TIMP-2,PCNA表达之间的相关性。(2)设计合成三条β3Gn-T8的siRNA,通过脂质体转染胃癌AGS细胞,通过RT-PCR,realtimePCR,western bloting等方法进行有效siRNA的筛选和鉴定。将阴性对照β3Gn-T8siRNA (β3Gn-T8NCsiRNA ) ,有效β3Gn-T8siRNA(β3Gn-T8siRNA-2)及β3Gn-T8真核正义表达载体(pEGFP-C1-β3Gn-T8),空载体(pEGFP-C1)转染入胃癌AGS细胞,以未处理AGS细胞做对照,通过HE细胞染色形态学观察,MTT法,流式细胞仪,Hoechst33258染色等方法检测β3Gn-T8对胃癌AGS细胞的增殖能力的影响;通过Transwell方法检测β3Gn-T8对胃癌AGS侵袭能力的影响;通过RT-PCR方法以及western bloting方法检测上调和下调β3Gn-T8表达对胃癌AGS细胞MMP-2,TIMP-2表达的影响;进一步通过明胶酶谱法检测下调β3Gn-T8对MMP-2酶活性的影响。(3)将转染β3Gn-T8siRNA-2的AGS细胞、转染pEGFP-C1-β3Gn-T8的AGS细胞以及未处理的AGS细胞通过皮下接种BALB/c裸小鼠的方法构建胃癌移植瘤模型。通过对移植瘤成瘤时间,生长曲线,最终体积,最终重量等指标的测量,研究β3Gn-T8对胃癌移植瘤增殖能力的影响。通过对移植瘤组织进行HE染色形中文摘要β3Gn-T8与胃癌增殖侵袭关系的研究态学观察,透射电镜形态学观察、免疫组织化学检测移植瘤中PCNA的表达进一步研究β3Gn-T8对胃癌移植瘤的侵袭能力、凋亡水平、增殖能力的影响。通过免疫组织化学方法检测胃癌移植瘤组织中β3Gn-T8,MMP-2,TIMP-2的表达强度,探究β3Gn-T8对胃癌移植瘤的侵袭能力的影响机制。结果:(1)β3Gn-T8在胃癌组织的表达(82/97)显著高于癌旁非肿瘤胃组织(33/89)(P<0.001);β3Gn-T8蛋白的表达与胃癌的临床分期显著正相关(P<0.01),与浸润深度显著正相关(P<0.05),与淋巴结转移显著正相关(P<0.01);β3Gn-T8在胃癌组织中的表达与MMP-2的表达显著正相关(P<0.01),与PCNA的表达显著正相关(P<0.05),而与TIMP-2的表达显著负相关(P<0.05)。(2)β3Gn-T8siRNA-2对β3Gn-T8的mRNA表达和蛋白表达有显著的抑制作用。对转染β3Gn-T8siRNA-2的AGS细胞进行增殖侵袭能力的系列检测,和对照组相比较,流式细胞仪检测和Hoechst33258染色显示细胞凋亡率增加(P<0.05);MTT法显示细胞的增殖能力下降(P<0.05);Transwell法显示细胞的侵袭能力下降(P<0.05);RT-PCR以及western bloting显示MMP-2的表达下降,而TIMP-2的表达升高(P<0.05);明胶酶谱法显示MMP-2的酶活性下降(P<0.05)。对转染pEGFP-C1-β3Gn-T8的AGS细胞进行增殖侵袭能力的系列检测,和对照组比较,流式细胞仪检测和Hoechst33258染色显示凋亡率下降,和对照组相比,差异不明显(P>0.05);MTT法显示细胞的增殖能力升高(P<0.05);Transwell法显示细胞的侵袭能力增强(P<0.05);RT-PCR以及western bloting显示MMP-2的表达升高,而TIMP-2的表达下降(P<0.05)。(3)胃癌AGS细胞裸鼠移植瘤成瘤率100%。β3Gn-T8siRNA组移植瘤成瘤时间、生长速度、最终重量、最终体积均显著小于对照组(P<0.05);pEGFP-C1-β3Gn-T8组生长速度、最终重量、最终体积均显著大于对照组(P<0.05),而成瘤时间与对照组无明显差异。移植瘤HE染色组织学观察发现,移植瘤呈现低分化胃癌的组织学特点,局部淋巴结、肝、肺均无转移瘤形成;pEGFP-C1-β3Gn-T8组可见移植瘤对周围横纹肌的侵袭现象,而对照组及β3Gn-T8siRNA组无此现象。透射电镜观察发现β3Gn-T8siRNA组凋亡现象较对照组和pEGFP-C1-β3Gn-T8组明显。免疫组化检测发现,pEGFP-C1-β3Gn-T8组β3Gn-T8、MMP-2的表达显著增加,而TIMP-2的表β3Gn-T8与胃癌增殖侵袭关系的研究中文摘要达显著下降(P<0.05),而PCNA的表达未见显著差异;β3Gn-T8siRNA组β3Gn-T8、MMP-2的表达显著下降,而TIMP-2的表达显著升高(P<0.05),而PCNA的表达未见显著差异。结论:(1)β3Gn-T8在人胃癌组织的表达增加,而且与胃癌的增殖侵袭转移能力正相关;β3Gn-T8在人胃癌组织中的表达与MMP-2、PCNA正相关,与TIMP-2负相关。β3Gn-T8可能通过对MMP-2、TIMP-2表达的调控促进了胃癌的侵袭转移。(2)β3Gn-T8增强胃癌AGS细胞的增殖能力和侵袭能力;下调AGS细胞β3Gn-T8的表达,导致MMP-2的表达、酶活性降低以及TIMP-2的表达升高;上调AGS细胞β3Gn-T8的表达,导致MMP-2的表达升高和TIMP-2的表达降低。β3Gn-T8具有调节MMP-2、TIMP-2表达以及MMP-2酶活性的功能,这可能是β3Gn-T8促进胃癌侵袭转移的机制之一。(3)β3Gn-T8增强胃癌裸鼠移植瘤的增殖和侵袭能力;下调移植瘤β3Gn-T8的表达,出现MMP-2的表达下降和TIMP-2的表达升高;上调移植瘤β3Gn-T8的表达,出现MMP-2的表达升高和TIMP-2的表达降低。β3Gn-T8在裸鼠移植瘤中对MMP-2、TIMP-2的表达具有调控作用,并可能通过这种调控作用影响胃癌移植瘤的侵袭转移。综上所述,糖基转移酶β3GnT8在胃癌组织的表达较癌旁非肿瘤胃组织显著增加;糖基转移酶β3GnT8对胃癌组织、胃癌细胞、胃癌裸鼠移植瘤的增殖、侵袭能力有增强作用;β3GnT8对胃癌组织、胃癌细胞、胃癌裸鼠移植瘤中的MMP-2、TIMP-2表达具有调控作用,推测这可能是其促进胃癌侵袭转移的机制之一。