大鼠骨髓间充质干细胞exosome对自身心肌分化及抗凋亡实验研究

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目的:研究经5-氮杂胞苷(5-aza)诱导或低氧培养后,骨髓间充质干细胞(Bonemarrow Mesenchymal stem cells,BM-MSCs)分泌的外泌体(exosome)对间充质干细胞向心肌细胞分化或抗凋亡能力的影响,并探讨exosome发挥心肌保护作用的机制。方法:取6周龄SD大鼠的胫骨及股骨分离骨髓间充质干细胞,用全骨髓差异贴壁法培养及纯化MSCs,并取第6代MSCs用于实验,分别提取正常培养的BM-MSCs分泌的exosome(BM-MEX)、低氧培养的BM-MSCs分泌的exosome(hypoEX)及5-aza诱导的BM-MSCs分泌的exosome(5-azaEX)用于体外研究。体外实验:(1)将BM-MEX和hypoEX分别加入到含血清的大鼠心肌细胞培养基中,置于5%低氧培养箱,72h后用利用流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡率;(2)将BM-MEX和5-azaEX分别加入到大鼠骨髓间充质干细胞培养基中,2周后通过免疫荧光染色比较上述两组细胞与心肌细胞的肌钙蛋白T(cTnT)、结蛋白(Desmin)、α-肌动蛋白(α-actin)表达情况;通过荧光定量PCR检测以上三组细胞的cTnT、Desmin、α-actin、GATA4及Nkx2.5的基因相对表达量。结果:(1)hypoEX组与BM-MEX组及阳性对照组相比,心肌细胞凋亡率均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);而BM-MEX组与阳性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)心肌细胞的α-actin、Desmin、cTnT、GATA-4、Nkx2.5基因表达量均远远高于5-azaEX组及BM-MEX组,差异有统计学意义(P<0.05);5-azaEX组细胞的上述5种基因表达量均稍高BM-MEX组,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)低氧培养的BM-MSCs所分泌的exosome能在体外减少缺氧环境下心肌细胞的凋亡率;而未经低氧处理的则不能降低心肌细胞凋亡率。(2)5-aza诱导的BM-MSCs所分泌的exosome未能促进BM-MSCs向成熟心肌细胞分化;但其cTnT、desmin、α-actin、GATA4及Nkx2.5的基因表达量较BM-MEX组有增多的趋势,BM-MSCs培养过程中持续加入5-aza诱导的exosome或可出现统计学意义。
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