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[目 的]乳腺癌是全球范围内女性发病率最高的恶性肿瘤,激素受体阳性的乳腺癌是其最常见的一种亚型。目前针对该种乳腺癌的治疗方式主要是化疗、内分泌治疗序贯疗法,其常用药物主要为多柔比星和他莫昔芬。临床上,许多进行化疗序贯内分泌治疗的患者,在化疗完成后表现出了内分泌治疗的原发性耐药,这或许与化疗治疗中耐药的产生有关。肿瘤的耐药极大阻碍了乳腺癌的治疗效果,因此,寻找耐药发生的机制,提高抗肿瘤药物的敏感性,可为乳腺癌的治疗提供重要参考。研究指出,外泌体可参与细胞间的信息传递,调节肿瘤的耐药。因此,本研究将探讨化疗耐药的乳腺癌细胞是否能通过外泌体传递耐药性,从而影响内分泌治疗,以期为优化激素受体阳性乳腺癌的治疗方式提供新的参考。[方法]1、检测MCF-7细胞和MCF-7/Adr细胞对多柔比星和他莫昔芬的敏感性使用不同浓度的多柔比星及他莫昔芬处理乳腺癌细胞MCF-7/Adr（多柔比星耐药型）、MCF-7（敏感型）,采用CCK8法检测活细胞数,并计算半数抑制浓度。2、多柔比星耐药MCF-7/Adr细胞外泌体的提取与鉴定（1）收集MCF-7/Adr细胞上清液,经超滤浓缩及纯化后获得外泌体（MCF-7/Adr-EXO）。（2）使用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）、Western Blot三种方式鉴定外泌体。3、检测MCF-7细胞对外泌体的摄取情况（1）使用DiI荧光染料标记外泌体。（2）采用免疫荧光法检测MCF-7细胞对外泌体的摄取情况。4、检测与MCF-7/Adr-EXO共培养后的MCF-7细胞对多柔比星和他莫昔芬的药物敏感性与MCF-7/Adr-EXO共培养48h后的MCF-7细胞,使用不同浓度的多柔比星及他莫昔芬对其进行处理,采用CCK8法检测活细胞数,并计算半数抑制浓度。5、检测在外泌体作用下药物对MCF-7细胞存活率的影响（1）CCK8检测不同浓度的外泌体作用24h、48h后MCF-7细胞的增殖情况,以选择合适的外泌体处理浓度。（2）实验设置PBS组与EXO组,予分别加入PBS、EXO干预24h后,加入一定浓度的多柔比星/他莫昔芬处理24h,CCK8检测药物处理后两组细胞的存活率。6、检测外泌体对MCF-7细胞凋亡的影响使用Annexin V-EGFP凋亡检测试剂盒对多柔比星/他莫昔芬作用后PBS组与EXO组细胞进行染色,荧光显微镜下观察细胞的凋亡情况。并采用Western Blot技术进一步检测凋亡蛋白的表达情况。[结 果]1、多柔比星对耐药细胞株MCF-7/Adr细胞的半数抑制浓度（IC50）为:1.674±0.015 μg/mL,明显高于其对敏感细胞株MCF-7细胞的半数抑制浓度（IC50）:0.054±0.003 μg/mL,差异有统计学意义（P＜0.05）。他莫昔芬对MCF-7/Adr细胞的IC50为:16.743±0.864μg/mL,明显高于其对MCF-7细胞的IC50:3.459±0.846 μg/mL（P＜0.05）。2、鉴定结果提示通过试剂盒提取的MCF-7/Adr-EXO符合外泌体的特性:（1）通过透射电镜可观察到圆形或椭圆形的茶托样结构,直径约30-150 nm;（2）NTA结果提示MCF-7/Adr-EXO直径分布主要为30-150 nm,峰值为135 nm,浓度为6.3×1010个/mL;（3）Western Blot结果可见CD63与TSG101在MCF-7/Adr-EXO中均有表达。3、MCF-7/Adr-EXO可被DiI染料标记为橙红色。倒置荧光显微镜下可观察到被DiI标记的MCF-7/Adr-EXO被MCF-7细胞摄取到细胞胞浆内。4、多柔比星对与MCF-7/Adr-EXO共培养后的MCF-7细胞（MCF-7+EXO细胞）的IC50 为:0.265±0.018 μg/mL,他莫昔芬对MCF-7+EXO细胞的IC50 为:5.012±0.32 μg/mL。MCF-7+EXO细胞对多柔比星和他莫昔芬的药物敏感性较MCF-7细胞均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。5、经MCF-7/Adr-EXO干预24h后的EXO组MCF-7细胞在药物（多柔比星/他莫昔芬）作用下的细胞存活率较PBS组的MCF-7细胞增高（P＜0.05）。6、凋亡检测结果:（1）荧光显微镜下可见经外泌体干预过的EXO组MCF-7细胞相比于PBS组MCF-7细胞在药物（多柔比星/他莫昔芬）作用下的细胞凋亡减少。（2）Western Blot结果可见,EXO组MCF-7细胞与PBS组相比,Cleaved caspase-3和Bad蛋白的表达水平均明显降低（P＜0.05）,表明MCF-7细胞经MCF-7/Adr-EXO干预后,在多柔比星或他莫昔芬作用下的细胞凋亡均减少。[结论]1、乳腺癌多柔比星耐药细胞株在对多柔比星高度耐药的同时,产生了对他莫昔芬的耐药性。2、乳腺癌多柔比星耐药细胞株可通过外泌体将多柔比星耐药性传递给敏感细胞株,同时还提高了敏感细胞株对他莫昔芬的抵抗性。3、乳腺癌多柔比星耐药细胞株可分泌外泌体,且其分泌的外泌体可被乳腺癌敏感细胞株有效摄取。