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肠球菌是引起医院感染的重要条件病原菌,所引起的感染在革兰阳性球菌中居第2位,可引起多器官系统感染。肠球菌引起的感染中,粪肠球菌(Enterococcus faecalis)感染比例最高,约为80-90%。相对于多重耐药性肠球菌检出率的不断增加,新型抗生素开发速度缓慢,临床治疗肠球菌感染面临巨大困难。噬菌体(bacteriophage)是能感染细菌、放线菌、螺旋体、单细胞藻类及真菌等微生物的病毒,其中裂解性噬菌体能高效、特异性地裂解宿主并复制大量子代噬菌体。筛选裂解谱广、裂解效率高的烈性噬菌体已经成为克制多重耐药性肠球菌新热点。本研究通过16SrDNA序列分析及随机引物扩增方法鉴定临床分离的粪肠球菌,并进行耐药性测定获得多重耐药性肠球菌。以多重耐药性肠球菌为宿主,从医院污水中分离纯化裂解性噬菌体,鉴定裂解性噬菌体形态、一步生长曲线、最佳感染复数、温度及pH稳定性等生物学特性;提取噬菌体基因组,通过二代测序方法测定基因组序列并比对及注释各基因功能。本研究共获得粪肠球菌30株,经鉴定30株粪肠球菌均为多重耐药菌,占分离株的100%。获得裂解性噬菌体2株,分别命名为LY0322和LY0323,均属尾噬菌体目长尾噬菌体科。LY0322的最佳感染复数为0.1,LY0323的最佳感染复数为0.001。一步生长曲线测定发现:LY0322潜伏期为20min,爆发期为20min,爆发量为40(PFU/cell);LY0323潜伏期为25min,爆发期为55min,爆发量为257(PFU/cell)。两株噬菌体在温度为50℃以下和pH为6、7时能够保持较高活性。LY0322可裂解8株粪肠球菌。LY0323可裂解7株粪肠球菌和2株屎肠球菌,该9株肠球菌均为多重耐药菌。SDS-PAGE分析LY0322有1条主要结构蛋白,分子质量范围为35KD,LY0323有两条主要结构蛋白,分子质量范围为15-35KD。LY0322基因组为线性双链DNA,长度为40934bp,G+C含量为34.84%;含有64个ORFs;与肠球菌噬菌体vB_EfaS_AL3具有较高的同源性。LY0323基因组为线性双链DNA,基因长40876bp,G+C含量为34.67%,含有60个ORF;与肠球菌噬菌体IME-EF4、vB_EfaS_AL2和Ec-ZZ2具有较高的同源性。两株噬菌体基因组均不含毒力基因及耐药性基因。本研究获得如下结论:1.获得粪肠球菌30株,16SrDNA序列30条并上传GenBank。2.经鉴定具有耐药性多重耐药性粪肠球菌30株。3.获得裂解性长尾噬菌体两株,且分析了其生物学性状。4.测定两株裂解性噬菌体基因组序列并上传GenBank,序列号为MH193369和MH375074。经过检测发现两株噬菌体为新发现噬菌体,且其不含毒力基因与耐药基因。综上所述,本研究筛选出的粪肠球菌噬菌体,其适应性强且安全,为未来实际应用提供了重要的基础数据。