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目的:采用超顺磁性氧化铁颗粒及多聚左旋赖氨酸复合体(SPIO-PLL)标记诱导后的大鼠胰岛素分泌细胞,测定生物学活性,应用1.5T MR仪进行体外细胞群成像,并移植入正常大鼠脾脏,进行活体成像,为胰岛素分泌细胞移植后的活体示踪提供依据。
方法:分离、培养及纯化大鼠骨髓间质干细胞(BMSCs),在体外用二期诱导法将其诱导成胰岛素分泌细胞,DTZ染色鉴定诱导后细胞的13细胞功能。SPIO-PLL标记胰岛素分泌细胞,普鲁士蓝染色显示细胞内铁;放射免疫分析法测定标记及未标记细胞的胰岛素分泌情况。将标记细胞与未标记细胞进行T<,1>WI、T<,2>WI、T<,2>*WI三个序列MR扫描,观察细胞群信号改变情况,测量信号强度,计算信号强度变化率。10只正常受体大鼠分二组,每组5只,将标记后的胰岛素分泌细胞(标记组)和未标记的胰岛素分泌细胞(未标记组)分别移植入脾脏,各组分别于移植前、移植后5天、10天、14天及21天对脾脏进行T<,1>WI、T<,2>WI、T<,2>*WI三个序列MR扫描,观察脾脏信号改变情况,在T<,2>*WI序列测量移植部位脾脏信噪比(signal-to-noise ratio,SNR),与各时间点脾脏组织切片普鲁士蓝染色对照,同时各时间点行肝脏组织切片普鲁士蓝染色。
结果:诱导成的胰岛素分泌细胞DTZ染色呈深红色。普鲁士蓝染色显示标记细胞蓝色铁颗粒位于细胞质内。标记后的细胞能分泌胰岛素,分泌量与未标记细胞相比差异无统计学意义(t=0.11,P>0.05)。标记细胞体外成像T<,2>*WI序列信号降低明显,未标记细胞各序列上信号均未见明显改变。标记组与未标记组移植前、移植后5天、10天、14天及21天脾脏移植部位的SNR分别为5.11±0.44、1.64±0.51、1.27±0.20、1.33+0.20、1.17+0.12,5.50±1.75、6.24±1.32、4.80+0.54、4.93±0.31、5.14±1.23。与移植前相比,标记组脾脏移植部位SNR明显降低,差异有统计学意义(F=182.92,P<0.05),但移植后各时间点SNR差异无统计学差异(Bonferroni法,P>0.05)。未标记前后SNR无统计学意义(P=0.98,P>0.05)。脾脏组织切片普鲁士蓝染色显示标记组染色阳性部位沿注射针道分布,与MRI信号降低部位大体一致,肝脏组织切片普鲁士蓝染色阴性,说明移植细胞未向脾脏外器官迁移。
结论:SPIO—PLL可以有效标记诱导后大鼠胰岛素分泌细胞,并且标记后不影响其生物学活性,临床应用型1.5 T MR仪可对经脾移植的标记细胞进行活体示踪。