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超氧化物歧化酶(Super oxide dismutase,SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的一种重要抗氧化酶,具有良好的抗氧化功能。然而,SOD极易失活且半衰期较短,为了提高其稳定性,通常采用物理吸附/包裹、化学修饰等方法对SOD改性。本试验采用了热变性提取方法从新生牛血中提取Cu/Zn-SOD,采用逐层自组装技术、以肝素(Heparin,HEP)与壳聚糖(Chitosan,CHI)为材料,对从新生牛血中分离提纯的SOD进行物理包裹试验,并对包裹后Cu/Zn-SOD的稳定性进行研究。结果如下: (1)在制备逐层自组装微囊(LBL-MC)时,通过单因素分析方法,对吸附时间、CHI浓度、HEP浓度及EDTA添加量这四个因素进行分析,结果表明,最优包埋时间为15min,HEP和CHI最优包裹浓度为2g/L,EDTA最佳添加浓度为:每30mgCaCO3微球应该加入0.75mL0.4mol/L EDTA,即EDTA与钙离子摩尔比为1:1时。 (2)试验对(HEP/CHI)5-SOD的热稳定、酸碱稳定性进行了研究。在热稳定性试验中,温度在70℃以下时,天然酶和修饰酶的相对酶活力相差不大,然而当温度升高到85℃时,修饰酶的相对酶活力还能够保持在84.5%,但是天然酶的相对酶活力下降到只有25.9%,(HEP/CHI)5-SOD的相对酶活力比天然SOD提高了3.3倍,其原因有可能是肝素/壳聚糖形成的微囊能够有效的保护SOD的次级键,SOD的分子空间结构没有被破坏,提高了(HEP/CHI)5-SOD的耐热稳定性。在酸碱稳定性分析中,天然酶在过酸过碱环境中的相对酶活力明显下降,而修饰酶在pH3~11之间,相对酶活力还能保持在80%以上,(HEP/CHI)5-SOD的相对酶活性较天然SOD提高了2倍。说明肝素壳聚糖逐层包埋能够对SOD的活性中心起到保护作用,降低酸碱环境对活性中心的影响,提高了SOD在酸碱环境中的稳定性。 (3)在抗胰蛋白酶水解能力的研究中,经胰蛋白酶水解240min后修饰酶的活力仍能保持在77%以上,而天然酶相对酶活力已下降到29%,在抗胰蛋白酶水解的能力上,(HEP/CHI)5-SOD的相对酶活性较天然SOD提高了2.7倍,证明了肝素壳聚糖外壳能够作为一层屏障将大分子胰蛋白酶阻隔开,保护SOD不受胰蛋白酶的水解。