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目的研究4℃暴露对雌性C57BL/6小鼠生长、动情周期(Estrous Cycle)及子宫组织蛋白表达的影响,为预防寒冷带来的生殖伤害提供依据。方法1.选择8周龄SPF级雌性C57BL/6小鼠20只,体重(17～20)g,根据体重随机分为对照组(Control Group)和实验组(Cold Group)各10只。实验组小鼠每笼两只置于4℃无风的医学低温舱中,每日4 h,连续冷暴露14天,将对照组小鼠置于常温动物房饲养,每2天称量体重并记录饲料剩余量与投放量。2.各组小鼠每天进行阴道脱落细胞学检查,观察每天所处的动情周期。14天后,全部小鼠腹腔注射麻醉,心脏采血,摘取子宫与卵巢。ELISA法检测小鼠血清性激素、白细胞介素水平,检测子宫组织氧化应激状态。子宫和卵巢进行组织病理学检查。3.选取对照组和实验组小鼠各3个子宫组织样本,经胰蛋白酶水解后,得到的肽段经液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术鉴定与分析,用Max Quant软件筛选和定量差异蛋白,用R包cluster Profiler进行基因注释(Gene Ontology,GO)富集分析,用String数据库整理归纳蛋白质-蛋白质相互作用(Protein-protein interactions,PPI)。结果1.与对照组小鼠相比,4℃暴露对小鼠一般生长情况有影响,如尿液和粪便增多,个别小鼠出现轻微脱毛现象,但未见明显伤害,无小鼠死亡的情况。2.整个实验期,与对照组比较,实验组小鼠体重较重,在第4、6、8、10天有统计学差异(P(27)0.05),但不影响食物利用率。实验组子宫湿重及脏器系数低于对照组(P(27)0.01)。3.与对照组小鼠动情间期相比,实验组动情间期为(5.83?1.72)天,显著延长(P(27)0.01)。4.与对照组相比,实验组小鼠血清FSH水平明显较高(P(27)0.01),为(6.58?0.21)m IU/ml,血清PRL和Prog水平明显较低(P(27)0.01),分别为(399.87?12.23)pg/ml和(5.15?2.52)ng/ml,血清E2、LH水平未见统计学差异(P(29)0.05)。5.实验组小鼠子宫腺管扩张,卵巢卵泡数量明显减少。实验组子宫SOD水平明显较低(P(27)0.01),为(6.79?0.76)ng/ml,MDA和CRP水平明显较高(P(27)0.01),分别为(22.80?0.83)nmol/ml和(245.31?13.45)ng/ml。6.经数据清洗,研究选取的子宫组织共筛选出71个差异表达的蛋白,其中39个表达上调,其中32个表达下调。基因注释富集分析结果,生物过程分类中,上调差异蛋白主要富集至氧化应激和突触囊泡介导转运过程,下调差异蛋白主要富集至二羧酸代谢过程。所处细胞位置分类中,上调差异蛋白多富集至囊泡、转运囊泡和突触囊泡,下调差异蛋白主要富集至多核糖体和胞质核糖体。分子功能分类中,上调差异蛋白主要富集至多聚泛素修饰依赖蛋白结合、修饰依赖蛋白结合等,下调差异蛋白主要富集至核糖核苷酸结合、嘌呤核糖核苷结合和嘌呤核苷结合等。蛋白质-蛋白质相互作用结果显示4℃暴露引起的差异蛋白可影响内质网信号肽转运。结论1.4℃暴露可以使雌性C57小鼠体重在短期内升高,但对摄食量和食物利用率影响不明显;可使动情间期延长,从而延长动情周期;还使小鼠血清FSH水平升高,PRL和Prog水平降低。2.4℃暴露使小鼠子宫组织部分蛋白表达水平发生改变,差异蛋白主要与氧化应激、二羧酸代谢、突触囊泡和内质网信号肽转运有关。