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香蕉枯萎病是香蕉生产中具有毁灭性的病害之一,生物防治是控制香蕉枯萎病较为有效且环保的方法。生物防治多采用定殖外来拮抗菌,作为持续防治土传病害的重要手段,但是土壤作为一个多种微生物的共生场所,外来拮抗菌的田间防治效果与土壤微生物环境有着密切的关系。本文选取了海南福山地区正常香蕉地和香蕉病害地,进行土壤微生物数量多样性分析,并构建16SrDNA文库和ITS文库,旨在通过对比两者之间的差异,探明香蕉枯萎病对土壤微生物多样性的影响,为香蕉枯萎病的生物防治提供参考依据。通过研究取得以下结果：1.应用平板计数法研究海南福山地区香蕉地土壤细菌和真菌数量,揭示了在香蕉生长过程中,细菌数量在苗期达到最高,之后就会减少；真菌在香蕉生长过程中逐渐增长。与正常香蕉地土壤微生物数量相比较,香蕉枯萎病导致土壤中真菌数量在香蕉孕蕾期明显增加,而细菌数量降低。2.从16SrDNA克隆文库上分析,本实验中正常香蕉地土壤16SrDNA文库所测得序列涵盖了6个门,多样性较高,其中优势菌为变形菌门,此外还有厚壁菌门、放线菌门、酸杆菌门、蓝藻门、硝化螺旋菌门等。与之比较,香蕉枯萎病病害地土壤中变形菌门的数量大大减少,以厚壁菌门和放线菌门为主要群落,由此可见在与镰刀菌导致的香蕉枯萎病的生态竞争中,变形菌门存在一定的劣势而厚壁菌门和放线菌门则能有效繁殖。提交序列至GeneBank核酸数据库,得到登录号为HM131954-HM131977。3.从ITS文库对比分析可以看出,土壤中真菌的种类明显少于细菌,正常香蕉地土壤以枝孢属及疣丝孢属居多,均属于半知菌类,占其中的50%左右,且菌属较多；此外也含有少量的半知菌类的镰刀菌属。在正常香蕉地土样的ITS文库中还存在纤毛动物以及与未培养的内生菌序列相近的序列。而在病害地土样中所含真核微生物中引发香蕉枯萎病的镰刀菌属为优势菌,测得少数的阳性克隆子属于枝孢属、疣丝孢属、尾枝虫属、刺皮属、链格孢属等。比较两者之间的区别,香蕉枯萎病发生地区镰刀菌占很大的优势,但仍有担子菌门的少量存在,这说明该类真菌进行病害防治和改良土壤更为有效。提交序列至Genebank核酸数据库,得到登录号为HM131979-HM132004。综上所述,本文认为香蕉枯萎病菌对香蕉地土壤微生物环境有一定的影响,香蕉枯萎病病害地土壤微生物群落多样性明显低于正常香蕉地土壤微生物群落。