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白色念珠菌(Candida albicans)是医院真菌感染的主要致病菌之一。近年来,随着广谱抗生素,皮质激素和免疫抑制剂的广泛应用,使得真菌感染的发病率和死亡率逐年上升。生物膜(biofilm,BF)的形成有助于帮助真菌躲避免疫系统的清除和药物的攻击,使治疗白色念珠菌感染变得更困难,因此,开发新型抗菌剂迫在眉睫。放线菌能够产生丰富的次级代谢产物,是挖掘生物活性物质的宝库。本实验利用新疆南疆地区丰富的微生物资源,筛选抑制白色念珠菌BF形成的菌株,确定分类地位,通过基因组测序信息分析发现活性相关基因,明确活性次级代谢产物的成分,探究抑膜机制,为抗膜剂新药的研发提供理论依据。1、以白色念珠菌为靶标菌,采用微孔板定量法,对流动风沙和连作棉田来源的170株放线菌进行筛选,结果表明,TRM43335、TRM43290、TRM43259等6株放线菌对白色念珠菌BF形成有抑制作用。2、基于表观特征、化学特征、基因型特征对菌株TRM43335T进行多相分类,确定该菌株为一株链霉菌新物种,命名为塔克拉玛干链霉菌。该菌株具有丰富的白色气生菌丝体,偶尔扭曲并分化成螺旋孢子链,每个孢子呈椭圆形,表面光滑,其在37℃,pH 8和1%(w/v)NaCl的存在下生长最佳。DNA的G+C含量为72.8 mol%。菌株TRM43335T能够利用主要糖为核糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖;主要磷脂是双磷脂酰甘油(diphosphatidylglycerol,DPG)、磷脂酰肌醇甘油酯(phosphatidylethanolamine,PIM)、磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol,PG)、磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)、磷脂酰乙醇胺(phosphatidylinositol,PE);主要的甲基萘醌是MK-9(H6);主要的细胞脂肪酸(>5%)为iso-C16:16:1 H(18.18%)、anteiso-C15:0(16.96%)、iso-C16:0(16.30%)、anteiso-C17:0(12.58%)、anteiso-C17:17:1 w9c(10.64%)和iso-C15:0(5.30%)。LL-二氨基庚二酸(LL-diaminopimelic acid,LL-DAP)作为菌株TRM43335T的全细胞诊断氨基酸。16S rRNA基因序列分析表明,菌株TRM43335T与Streptomyces desertarenae SYSU D8023T的序列相似性最高98.69%。与最高相似菌株之间的平均核苷酸一致性(Average Nucleotide Identity,ANI)相关性和DNA-DNA杂交(DNA-DNA hybridization,dDDH)值分别为89.23%和36.70%。保藏号为TRM43335T(CCTCC AA 2018052T=KCTC 49254T)3、利用Nanopore测序技术对菌株TRM43335T进行了全基因组的测序,并通过各种生物信息学分析工具对其进行合理分类和注释。最终获得了长度为6136714 bp的全基因组序列,其中5163个基因进行了明确的功能注释。4、通过硫酸铵沉淀法对菌株TRM43335T发酵液蛋白质进行提取。使用Sephadex G-100层析柱和DEAE离子交换层析柱进行分离纯化,并使用SDS-PAGE进行检测。活性检测发现馏分C、D、E活性好,并进行后续的理化因素的探究,结果表明该馏分对热不敏感,对酸碱较稳定,pH值为7时抑膜活性降低,金属离子和有机试剂对抑膜无促进作用。通过牛乳平板实验、表面疏水性实验、降解胞外DNA实验对馏分蛋白抑制白色念珠菌BF的形成机制进行测定。结果表明馏分C与D蛋白可以水解胞外蛋白和降低表面疏水性,E蛋白既可以水解胞外蛋白,降低表面疏水,还可以降解胞外DNA。