论文部分内容阅读
IL-17及Th17细胞与系统性红斑狼疮关系的研究及地塞米松对IL-17的影响第一部分系统性红斑狼疮患者血浆IL-17及IFN-γ的表达水平及其临床意义目的：探讨SLE患者血浆IL-17、IFN-γ水平的变化及其与狼疮疾病活动的关系及临床意义。方法：收集25例SLE患者和22例健康对照者,根据SLE疾病活动性评分(SLEDAI)将病人分为活动组和非活动组。应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ABC-ELISA)测定SLE患者和对照者血浆IL-17、IFN-γ水平,并分别与SLEDAI积分、抗dsDNA抗体滴度、补体C3、C4等临床或实验室指标进行相关性分析。结果：SLE患者血浆IL-17水平(148.24±76.55)pg/ml明显高于正常对照组(64.59±29.27)pg/ml,血浆IFN-γ水平(35.06±21.80)pg/ml亦高于对照组(13.53±7.94)pg/ml；SLE活动组血浆IL-17明显高于非活动组和正常对照组(P<0.005和P<0.001)；SLE非活动组患者血浆IL-17水平亦高于正常对照组(P=0.035)。而SLE活动组患者血浆IFN-γ水平与非活动组患者相比,差异无统计学意义(P>0.05)。患者血浆IL-17水平与SLEDAI积分呈正相关(r=0.681,P<0.001)；而血浆IFN-γ水平与SLEDAI无相关性(P>0.05)。SLE血浆IL-17水平与抗dsDNA抗体水平呈正相关性(r=0.492,P=0.015),与补体C3、C4水平呈负相关性(r=-0.529,P=0.008；r=-0.534,P=0.027)；而SLE血浆IFN-γ水平与抗dsDNA抗体、补体C3、C4均未见明显相关性(P均>0.05)。结论：SLE患者血浆IL-17表达水平明显增高,与疾病活动度SLEDAI评分呈正相关,且与一些已经公认的能够提示疾病活动性的免疫学指标呈正相关,如高水平抗dsDNA抗体,低水平的补体C3、C4。提示其可能是反映SLE患者病情活动性的新指标。第二部分系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中Th17细胞及其它T细胞亚群的表达目的：通过对SLE患者外周血Th17、Tc17、Th1和Tc1细胞亚群检测,进一步探讨Th17细胞在SLE发病机制中的作用及评价Th17与其它T细胞亚群的关系。方法：病例和对照同第一部分。分离出SLE患者和正常对照者外周血单个核细胞,按照空白孔、PMA/Ionomycin孔分别培养6小时,运用四色流式细胞术,检测SLE患者和正常对照者Th17细胞(CD3+CD8-IL-17+)、Tc17细胞(CD3+CD8+IL-17+)、Th1细胞(CD3+CD8-IFN-y+)、Tc1细胞(CD3+CD8+IFN-y+)、双阳细胞CD3+CD8-IL-17+IFN-γ+、CD3+CD8+IL-17+IFN-y+比例,评价各个T细胞亚群之间的关系及Th17细胞与SLE疾病活动度的相关性。结果：SLE患者外周血循环中Th17细胞的比例(2.49±1.49)%显著高于正常对照(1.47±0.73)%(P<0.001),SLE活动组患者Th17细胞比例明显高于非活动组和正常对照组(P<0.05和P=0.001)；SLE患者Th1、Tc17细胞百分率与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)；而SLE患者Tc1细胞百分率(44.89±16.43)%明显高于对照组(31.41±9.06)%(P=0.004)；SLE患者外周血中CD3+CD8-IL-17+IFN-γ+细胞比例(0.51±0.38)%较正常对照组(0.30±0.19)%升高(P=0.047)。Th17与Th1细胞亚群间存在显著的正相关性(r=0.527,P=0.007),而且SLE患者Th17/Th1比值(0.15±0.09)亦高于正常对照组(0.09±0.04)(P=0.021)。SLE患者PBMCs中Th17细胞百分比与SLEDAI呈正相关性(r=0.426,P=0.034),而SLE患者Th1、Tc1细胞百分比与SLEDAI均无相关性(两者P>0.05),Th17/Th1比例与SLEDAI亦无相关性(P>0.05)；SLE肾病组Th17细胞比例明显高于无肾病组(P=0.008)；未发现SLE患者抗dsDNA抗体、血清C3、C4水平、24小时尿蛋白、血沉、C反应蛋白等实验室参数与Th17细胞百分比之间的直线相关性(P均>0.05)。结论：在SLE发生和发展过程中,Th17细胞亚群比例增加可能是SLE发病中的一个重要的决定因素,Th17细胞可能通过其分泌的细胞因子作用于不同靶细胞,诱导其它细胞因子的产生,从而导致SLE患者机体免疫调节功能的紊乱,诱导疾病的发生。第三部分地塞米松对系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中T细胞亚群比例及炎症因子分泌的影响目的：探讨地塞米松对SLE患者PBMCs中Th17细胞及其他T细胞表达以及上清液中分泌IL-17、IFN-γ水平的影响,为临床使用糖皮质激素治疗SLE提供新的理论依据和实验室基础。方法：病例和对照同第一部分。分离SLE患者和正常对照者PBMCs,按照空白孔、PMA/Ionomycin孔、PMA/Ionomycin+地塞米松孔分别培养6小时或24小时。运用四色流式细胞术,检测SLE患者和正常对照Th17细胞(CD3+CD8-IL-17+)、Tc17细胞(CD3+CD8+IL-17+)、Th1细胞(CD3+CD8+IFN-γ+)、Tc1细胞(CD3+CD8+IFN-γ+)、双阳细胞CD3+CD8-IL-17+IFN-γ+、CD3+CD8+IL-17+IFN-γ+比例。培养24小时后收集上清,通过ELISA方法检测PBMCs上清液中IL-17、IFN-γ水平。结果：无PMA刺激条件下,SLE患者PBMCs培养上清液中细胞因子水平及PBMCs中Th17、Tc17、Th1、Tc1、CD3+CD8-IL-17+IFN-γ+、CD3+CD8+IL-17+IFN-γ+细胞亚群的比例与对照组均无显著差异(P>0.05)；加入PMA/Io刺激后,SLE患者PBMCs分泌IL-17、IFN-γ的水平显著高于无刺激组(P<0.001),同样,加入PMA/Io刺激后,SLE组PBMCs中上述六群细胞比例较无刺激时亦明显升高(P<0.01)；地塞米松可明显抑制PMA刺激后的PBMCs分泌IL-17和IFN-γ水平,并显著降低刺激后的PBMCs中Th17、Tc17、Th1、Tc1细胞比例,其中,地塞米松对SLE患者PBMCs分泌IL-17抑制作用更强。结论：地塞米松可明显抑制PMA刺激后的PBMCs分泌IL-17水平和Th17细胞的表达,DEX对Th1细胞分泌的IFN-γ亦有明显抑制作用,提示DEX通过使Th1/Th2平衡向Th2偏移和抑制Th17细胞活性而发挥抗炎作用。其疗效可能与抑制IL-17、IFN-γ的程度有关,此研究为糖皮质激素的临床应用提供了理论基础和实验室依据。