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目的:瘢痕是人体创伤修复过程中必然的产物。然而,对于一些特殊患者,特别是烧伤患者,伤口的愈合过程可能会导致纤维化增生性瘢痕,并且常常伴随严重的功能障碍和美容问题。在创面修复的过程中诸多因素参与了增生性瘢痕的形成,如止血时间延迟、过度的炎症反应、长时间的再生上皮化、过多的细胞外基质产生、新血管形成的异常增多、非典型的细胞外基质重构和细胞凋亡的减少等等。瘢痕过度形成往往会对患者的生理和心理产生不良影响。因此,临床上迫切需要开发一种既能快速愈合伤口又能减少瘢痕形成的治疗策略。方法:通过慢病毒介导的转染获得过表达miR-29b的人骨髓间充质干细胞来源外泌体(B-miR-29b-Exos),并采用透射电镜(TEM)、粒径分析、Western blot和qPCR进行验证。采用荧光素酶报告研究miR-29b的作用基因和靶点,通过Western blot验证B-miR-29b-Exos和人骨髓间充质干细胞来源外泌体(B-Exos)与Akt/Erk和TGF-β1/Smad3信号通路。体外实验,通过CCK-8、迁移实验、成管实验、VEGF/ColⅠ的Elisa实验验证两种外泌体对内皮细胞细胞系(EA.hy926)和人皮肤成纤维细胞(HFF-1)的增殖、迁移、成管和VEGF/Col Ⅰ表达情况。通过点击化学原理制备双分子层巯基化海藻酸钠-双键化聚乙二醇(BSSPD)水凝胶,用于外泌体的序贯释放(SR-Exos@BSSPD)。通过红外光谱(FTIR)、旋转流变仪对水凝胶的结构组成及力学性能进行了表征。水凝胶上层装载B-miR-29b-Exos,下层装载B-Exos。不同外泌体作用于伤口修复的不同阶段,以实现伤口的快速无瘢痕愈合。体内应用于大鼠全层皮肤缺损和兔耳瘢痕模型进行验证。结果:B-Exos从下层水凝胶释放,通过促进成纤维细胞和内皮细胞在凝血和增殖早期的增殖和迁移,促进血管生成和胶原沉积。B-miR-29b-Exos从上层水凝胶释放,在晚期重建和成熟阶段抑制过度的毛细血管增殖和胶原沉积发挥了重要作用。SR-Exos@BSSPD组与B-Exos@BSSPD组治疗大鼠、兔耳全层皮肤缺损创面修复率、增殖期血管生成、胶原沉积无明显差异。但在创面愈合成熟阶段,SR-Exos@BSSPD组新生血管结构更均匀,胶原排列更规则,Ⅰ/Ⅲ型胶原比例更接近于正常皮肤,增生性瘢痕组织厚度明显减少。结论:在创面愈合的凝血期、炎症期和重建期早期,B-Exos在水凝胶作用下能促进血管生成和胶原沉积,加速创面愈合。B-miR-29b-Exos通过miR-29b-3p抑制Akt Erk1/2和Smad3/TGFβ1信号通路。因此,在重建后期和成熟阶段,SA-SH/PEG-DA水凝胶上层释放的B-miR-29b-Exos抑制了过度的血管生成和胶原沉积,从而减少了增生性瘢痕的形成。依照创面修复阶段设计的序贯释放外泌体的BSSPD水凝胶能够促进创面修复,抑制增生性瘢痕的形成,具有作为无瘢痕创面愈合的无细胞治疗的巨大潜力。