乳腺癌细胞与人成骨样细胞株MG-63相互作用的体外研究

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目的乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一,易发生骨转移,乳腺癌骨转移主要表现为溶骨性破坏。在骨髓微环境中,成骨细胞(osteoblast,OB)和破骨细胞(osteoclast, OC)共同维护着骨髓微环境的平衡。当乳腺癌溶骨性骨转移发生时,可引起骨髓微环境中一系列相关细胞因子的变化,改变OB和OC之间的平衡,表现为OB活性受抑制,OC活性增强,促进骨吸收而造成骨质破坏。目前有关乳腺癌骨转移发病机制的研究多集中在OC与乳腺癌细胞之间的相互作用,而关于乳腺癌细胞和OB之间的研究则很少。本实验通过比较两种乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞和T47D细胞以及人成骨样细胞株MG-63细胞在细胞形态、增殖和迁移等三方面的相互影响,探讨OB在乳腺癌骨转移发生发展中的可能作用。方法首先分别培养人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、T47D与人成骨样细胞株MG-63,在细胞生长至对数生长期时分别留取不含血清的MDA-MB-231、T47D及MG-63细胞上清。再研究乳腺癌细胞与MG-63细胞间的相互作用,首先观察MDA-MB-231和T47D细胞上清对MG-63细胞形态的影响;采用CCK-8法分别测定MDA-MB-231和T47D细胞上清对MG-63细胞增殖的影响;使用划痕法测定MDA-MB-231和T47D细胞上清对MG-63细胞迁移的影响。在此基础上再进一步观察MG-63细胞上清对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和T47D细胞形态的影响;CCK-8法测定MG-63细胞上清对MDA-MB-231和T47D细胞增殖的影响;划痕法测定MG-63细胞上清对MDA-MB-231、T47D细胞迁移的影响。结果1. MDA-MB-231/T47D细胞上清对MG-63细胞的生长抑制作用(1)形态:用含50%的MDA-MB-231/T47D细胞上清的培养基培养MG-63细胞36h后,与对照组相比,MG-63细胞形态发生改变,细胞突起和细胞连接减少。(2)增殖:加入25%、50%、75%、100%浓度的MDA-MB-231/T47D细胞上清后1-6天(day,d),MG-63细胞的增殖受到抑制,抑制率最高可达50%,实验组MG-63细胞的光密度值(optical density, OD)与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),组间相比差异有统计学意义(P<0.05)。培养1-6d后两种乳腺癌细胞系100%上清对MG-63细胞抑制率的比较结果显示,A组(MDA-MB-231细胞上清组)抑制率明显大于B组(T47D细胞上清组),两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。(3)迁移:随着MDA-MB-231/T47D细胞上清浓度的增加,MG-63细胞间划痕宽度随之增加。2.MG-63细胞上清对乳腺癌细胞的生长抑制作用(1)形态:用含50%的MG-63细胞上清的培养基培养MDA-MB-231/T47D细胞36h后,与对照组相比,细胞形态欠饱满,细胞密度较小。(2)增殖:加入25%、50%、75%、100%浓度的MG-63细胞上清后1-6d,MDA-MB-231/T47D细胞的增殖受到抑制,抑制率可达40%,实验组乳腺癌细胞的0D值与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),组间相比差异有统计学意义(P<0.05)。比较100%MG-63细胞上清1-6d对两种乳腺癌细胞的抑制率,a组(MDA-MB-231细胞组)的抑制率明显高于b组(T47D细胞组),两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。(3)迁移:随着MG-63细胞上清浓度的增加,MDA-MB-231/T47D细胞间的划痕宽度随之增加。结论1.乳腺癌细胞系MDA-MB-231及T47D细胞上清对人成骨样细胞株MG-63细胞形态有影响,并抑制MG-63细胞的增殖和迁移,MDA-MB-231细胞上清对MG-63细胞增殖的抑制作用强于T47D细胞上清。2.人成骨样细胞株MG-63细胞上清对乳腺癌细胞系MDA-MB-231/T47D细胞形态有影响,并可抑制MDA-MB-231/T47D细胞的增殖和迁移,MG-63细胞上清对MDA-MB-231细胞的抑制作用较对T47D细胞强。
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