狗蔷薇PLBs发育相关基因RcABI3和RcBBM的功能分析

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gaolch009
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类原球茎(PLBs)是植物植株再生、细胞工程育种及遗传转化的良好受体材料。我们已在九种蔷薇属植物上建立了基于PLBs发生途径的再生体系,PLBs在蔷薇上发生率较高,具有早萌的特点,萌芽率不稳定;在月季上发生率极低,且几乎不萌芽,这极大限制了其在生产上的应用。本文研究了与植物胚胎早萌相关的ABI3基因及影响胚性组织产生和芽再生的BBM基因,以期为实现蔷薇属植物PLBs在发育过程中具备休眠特性和提高PLBs生成率及萌芽率提供理论指导,进而为蔷薇属植物分子育种的成功建立奠定理论基础。ABI3通过调控ABA应答基因,进而影响胚胎休眠和萌发。我们利用RACE的方法在狗蔷薇中分离到了三个ABI3同源基因,分别命名为RcABI3a, RcABI3b和RcABI3c。三者均含有一个酸性结构域A1和三个基本结构域B1,B2和B3。RT-PCR结果表明,RcABI3s仅在种子和发育三周的PLBs中表达。RcABI3a-GFP融合蛋白分布于整个细胞,而RcABI3b-GFP和RcABI3c-GFP融合蛋白均定位在细胞核上。35S::RcABI3a过表达abi3-6突变体株系的种子未恢复为野生型种子形态,而35S::RcABI3b和35S::RcABI3c转基因株系则恢复为野生型形态,且种子几乎完全恢复了对ABA的敏感性。另外,与野生型相比,35S::RcABI3b过表达野生型株系对ABA的敏感性并无明显差别,但却表现出花期延迟和雄性不育等性状。这些结果显示RcABI3b和RcABI3c可能为促进PLBs休眠的有价值的基因,另外,RcABI3b可为蔷薇花期及雄蕊发育的研究提供参考。在离体组织培养条件下,BBM不但能增强芽的再生能力,而且促进植物营养组织向胚性组织的转变。我们利用RACE方法从狗蔷薇中分离到两个BBM基因,分别命名为RcBBM1和RcBBM2.两者均包含有bbm-1结构域和euANT系基因的所有结构域=RT-PCR结果表明RcBBMs在幼根,愈伤和PLBs发育的各个阶段均能检测到。RcBBM1-GFP和RcBBM2-GFP融合蛋白均定位在细胞核上。35S::RcBBM1和35S::RcBBM2转基因拟南芥株系在离体组织培养条件下均表现出了增强芽再生的能力,且表现出短根,开花时间延迟,叶片畸形等性状,但并未出现自发胚的形成。这些结果显示RcBBMs可能为增强蔷薇属植物芽再生的有价值基因。为了进一步研究RcBBM基因的时空表达规律,我们采用反向PCR技术从狗蔷薇中分离了RcBBM基因的5上游序列,该片段含有TATA-box和多个CAAT-box等启动子的基本元件,及与胚和胚乳特异性基因转录所必需的元件。进一步将RcBBMp与GUS报告基因融合,导入到拟南芥中,发现GUS基因在子叶、根、下胚轴和芽顶端等细胞分裂生长活跃的部位表达。为了进一步研究RcABI3和RcBBM基因在PLBs发育过程中的功能,我们在拟南芥上初步建立了PLBs再生体系。这一体系发生周期短,发生率高,不仅可为研究相关基因在PLBs发育过程中的功能提供一个模式系统,还有望大大提高研究PLBs发生发育机制的效率。
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