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目的：观察人参皂苷Rh2对miR-585-5p、MITF表达调控作用，以及对人胃癌细胞系NCI-N87增殖、凋亡及迁移的影响。
方法：
1．qRT-PCR方法检测人胃癌细胞系中miR-585-5p的表达差异；CCK-8试剂盒检测GRh2对人胃癌细胞增殖活性的影响；进一步用qRT-PCR实验观察GRh2对人胃癌细胞中miR-585-5p表达的影响。
2.体外培养人胃癌细胞NCI-N87，细胞集落形成实验检测GRh2对细胞克隆形成能力的影响；Hoechst33342/PI染色实验检测GRh2对细胞凋亡形态的影响；流式细胞术检测GRh2对细胞凋亡率的影响；划痕愈合实验、Transwell迁移实验观察GRh2对细胞迁移能力的影响。
3．qRT-PCR、WesternBlot实验检测GRh2对NCI-N87胃癌细胞中MITF表达的影响。LV-has-miR-585-5p-inhibition慢病毒感染人胃癌细胞NCI-N87，构建miR-585-5p低表达细胞系(Down Group,Down)。qRT-PCR和WesternBlot实验观察GRh2对miR-585-5p低表达细胞中miR-585-5p、MITF表达影响。
结果：
1.miR-585-5p在人胃癌细胞NCI-N87、AGS细胞中低表达，SGC-7901细胞中高表达。
2.GRh2抑制人胃癌NCI-N87、AGS和SGC-7901细胞增殖，呈现明显的剂量依赖关系(P＜0.01)，差异有统计学意义。GRh2干预人胃癌NCI-N87、AGS和SGC-7901细胞48h的IC50值分别为64.67μM、36.99μM、39.03μM。研究发现，GRh2可以上调miR-585-5p表达(P＜0.05)，差异有统计学意义。
3.GRh260μM作为实验组药物干预浓度，处理人胃癌细胞NCI-N87后，细胞集落实验发现细胞集落数量少，细胞集落变小。荧光显微镜下观察，Hoechst33342染色后对照组细胞亮度均匀，呈浅蓝色；实验组细胞碎片明显，荧光亮度增加，呈浓染致密的斑块状荧光；PI染色后实验组呈现大片红色亮点。流式细胞仪检测细胞凋亡率发现，与对照组(10.10±1.55)%相比，实验组(38.83±5.33)%细胞总凋亡率明显增加(t＝8.97,P＜0.001)，差异具有统计学意义。Transwell实验发现，对照组细胞迁移数量为(337.4±26.38)，实验组细胞迁移数量为(56.56±6.60)，实验组细胞迁移能力明显下降(t＝10.33，P＜0.0001)，差异有统计学意义。划痕愈合实验比较48h后的划痕面积，对照组的为(82.78±1.46)%，实验组为(100.0±1.56)%，细胞划痕愈合能力下降(t＝17.05，P＜0.05)，差异具有统计学意义。
4.在人胃癌细胞NCI-N87中，GRh260μM可以下调MITFmRNA表达水平(P＜0.05)，差异有统计学意义；下调MITF蛋白表达水平(F＝240.7，P＜0.0001)，差异有统计学意义。
5.LV-has-miR-585-5p-inhibition慢病毒感染NCI-N87胃癌细胞后，miR-585-5p表达下调(t＝3.374，P＜0.05),MITF蛋白表达升高(t＝11.9，P＜0.001),提示miR-585-5p低表达细胞系构建成功。观察GRh260μM作用于miR-585-5p低表达细胞系后，miR-585-5p表达水平升高(t＝12.98，P＜0.001)，MITF蛋白表达水平下降(t＝27.91，P＜0.0001)，差异有统计学意义。
结论：
1.GRh2上调人胃癌细胞NCI-N87中miR-585-5p表达；
2.GRh2具有抑制NCI-N87细胞的增殖，诱导细胞凋亡及抑制细胞迁移的作用；
3.GRh2通过调控miR-585-5p/MITF信号通路，影响人胃癌细胞NCI-N87的生物学行为。
方法：
1．qRT-PCR方法检测人胃癌细胞系中miR-585-5p的表达差异；CCK-8试剂盒检测GRh2对人胃癌细胞增殖活性的影响；进一步用qRT-PCR实验观察GRh2对人胃癌细胞中miR-585-5p表达的影响。
2.体外培养人胃癌细胞NCI-N87，细胞集落形成实验检测GRh2对细胞克隆形成能力的影响；Hoechst33342/PI染色实验检测GRh2对细胞凋亡形态的影响；流式细胞术检测GRh2对细胞凋亡率的影响；划痕愈合实验、Transwell迁移实验观察GRh2对细胞迁移能力的影响。
3．qRT-PCR、WesternBlot实验检测GRh2对NCI-N87胃癌细胞中MITF表达的影响。LV-has-miR-585-5p-inhibition慢病毒感染人胃癌细胞NCI-N87，构建miR-585-5p低表达细胞系(Down Group,Down)。qRT-PCR和WesternBlot实验观察GRh2对miR-585-5p低表达细胞中miR-585-5p、MITF表达影响。
结果：
1.miR-585-5p在人胃癌细胞NCI-N87、AGS细胞中低表达，SGC-7901细胞中高表达。
2.GRh2抑制人胃癌NCI-N87、AGS和SGC-7901细胞增殖，呈现明显的剂量依赖关系(P＜0.01)，差异有统计学意义。GRh2干预人胃癌NCI-N87、AGS和SGC-7901细胞48h的IC50值分别为64.67μM、36.99μM、39.03μM。研究发现，GRh2可以上调miR-585-5p表达(P＜0.05)，差异有统计学意义。
3.GRh260μM作为实验组药物干预浓度，处理人胃癌细胞NCI-N87后，细胞集落实验发现细胞集落数量少，细胞集落变小。荧光显微镜下观察，Hoechst33342染色后对照组细胞亮度均匀，呈浅蓝色；实验组细胞碎片明显，荧光亮度增加，呈浓染致密的斑块状荧光；PI染色后实验组呈现大片红色亮点。流式细胞仪检测细胞凋亡率发现，与对照组(10.10±1.55)%相比，实验组(38.83±5.33)%细胞总凋亡率明显增加(t＝8.97,P＜0.001)，差异具有统计学意义。Transwell实验发现，对照组细胞迁移数量为(337.4±26.38)，实验组细胞迁移数量为(56.56±6.60)，实验组细胞迁移能力明显下降(t＝10.33，P＜0.0001)，差异有统计学意义。划痕愈合实验比较48h后的划痕面积，对照组的为(82.78±1.46)%，实验组为(100.0±1.56)%，细胞划痕愈合能力下降(t＝17.05，P＜0.05)，差异具有统计学意义。
4.在人胃癌细胞NCI-N87中，GRh260μM可以下调MITFmRNA表达水平(P＜0.05)，差异有统计学意义；下调MITF蛋白表达水平(F＝240.7，P＜0.0001)，差异有统计学意义。
5.LV-has-miR-585-5p-inhibition慢病毒感染NCI-N87胃癌细胞后，miR-585-5p表达下调(t＝3.374，P＜0.05),MITF蛋白表达升高(t＝11.9，P＜0.001),提示miR-585-5p低表达细胞系构建成功。观察GRh260μM作用于miR-585-5p低表达细胞系后，miR-585-5p表达水平升高(t＝12.98，P＜0.001)，MITF蛋白表达水平下降(t＝27.91，P＜0.0001)，差异有统计学意义。
结论：
1.GRh2上调人胃癌细胞NCI-N87中miR-585-5p表达；
2.GRh2具有抑制NCI-N87细胞的增殖，诱导细胞凋亡及抑制细胞迁移的作用；
3.GRh2通过调控miR-585-5p/MITF信号通路，影响人胃癌细胞NCI-N87的生物学行为。